Выбор места на борту — БЕЛАВИА
Белавиа предлагает услугу «Предварительный выбор места» на всех регулярных рейсах авиакомпании за исключением рейсов в/из Бейрута, из Амстердама, Караганды, Манчестера и Паланги.
Общие положения о предоставлении услуги
Предварительный выбор мест (далее — услуга) — предоставление пассажиру возможности выбора по его желанию места определенной категории в салоне экономического класса воздушного судна.
Пассажиры бизнес класса смогут воспользоваться услугой предварительного выбора места в салоне воздушного судна без дополнительной оплаты.
Услугу можно приобрести на сайте belavia.by в разделе «Статус бронирования» при наличии авиабилета с подтвержденным бронированием на собственный регулярный рейс БЕЛАВИА. Приобретение услуги также возможно в процессе покупки авиабилета на сайте belavia.by. Стоимость услуги установлена в зависимости от категории места, примененного в авиабилете тарифа, статуса участника в программе «Белавиа Лидер», а также других условий и отображается на шаге выбора места.
В рамках оказания услуги пассажиру предоставляется возможность предварительного выбора места одной из следующих категорий:
Категория 1 — Extra Leg Room Seat – место в салоне бизнес-класса* по авиабилету экономического класса, при отсутствии на рейсе пассажиров бизнес-класса;
Категория 2 — Bulkhead Seat – место в 1-м ряду салона эконом-класса, расположенном за салоном бизнес-класса, в самолетах с конструктивно выделенным салоном бизнес-класса.
Категория 3 — Exit Row Seat – место в рядах, расположенных напротив аварийных выходов, в которых увеличено пространство для ног;
Категория 4 — Front Of Cabin Seat – места в начале салона эконом-класса, за исключением упомянутых выше категорий;
Категория 5 — Standard Seat – стандартные места в салоне эконом-класса, за исключением упомянутых выше категорий.
* места категории 1 предлагаются в случае выполнения рейса самолетом с конструктивно выделенным салоном бизнес-класса. Приобретение места категории 1 не влечет за собой предоставление каких-либо дополнительных услуг (питание бизнес-класса, отдельная стойка регистрации и т.д.)
— 24 часов до вылета рейса для мест категории 5;
— 3 часов до вылета для мест категорий 1,2,3,4.
За 24 часа до вылета места категории 5 становятся доступны для онлайн-регистрации бесплатно.
Внимание! Приобретение услуги не означает прохождение регистрации на рейс. Пассажир должен пройти регистрацию на рейс удобным для него способом – онлайн, в киоске самостоятельной регистрации (если имеются) или на стойке регистрации в аэропорту в порядке общей очереди.
С условиями предоставления услуги «Предварительный выбор мест» участникам Белавиа Лидер элитных уровней можно ознакомиться здесь.
Для пассажиров чартерных рейсов услуга доступна за 24 часа до вылета рейса во время онлайн-регистрации на сайте belavia.by. Услуга доступна только при вылете из Республики Беларусь. Пассажиров чартерных рейсов, которые не воспользовались услугой, система зарегистрирует бесплатно на свободные места. Пассажирам, которые регистрируются одновременно, предоставляются места рядом при наличии возможности.
Оформление, оплата и порядок оказания услуги
БЕЛАВИА оставляет за собой право ограничивать предоставление услуги для различных типов воздушных судов и на различных маршрутах в соответствии с требованиями безопасности полетов и техническими возможностями, а также в зависимости от категории пассажира.
Услуга предоставляется на собственных регулярных рейсах БЕЛАВИА. Плата за услугу взимается за полетный сегмент.
При изменении расписания, замене воздушного судна, изменении компоновки салона в целях сохранения за пассажиром заказанной услуги БЕЛАВИА осуществляет изменение забронированного места в пределах выбранной категории в автоматическом режиме, но не гарантирует сохранение номера назначенного места. БЕЛАВИА предпримет все возможные меры для сохранения совместного размещения пассажиров, забронировавших услугу в одном бронировании. Оформляя услугу, пассажир дает свое согласие на изменение места в пределах оплаченной категории в указанных выше случаях.
Услуга считается оказанной по факту перевозки пассажира на месте забронированной категории при условии оплаты услуги и оформления авиабилета.
В случае технической невозможности предоставить место оплаченной категории, БЕЛАВИА произведет возмещение полной стоимости услуги.
БЕЛАВИА не обязана уведомлять пассажиров об изменениях в услуге, связанных с заменой типа и/или компоновки воздушного судна без изменения расписания движения воздушного судна. О наличии изменений в услуге пассажир может узнать при просмотре подробной информации в разделе «Статус бронирования» на сайте БЕЛАВИА или при самостоятельной онлайн-регистрации.
В случае, если в процессе приобретения услуги выбрано место категории, к пассажирам которых предъявляются специальные требования, пассажир будет иметь возможность ознакомиться с предъявляемыми авиакомпанией требованиям до этапа оплаты услуги. Покупка такого места означает подтверждение соответствия пассажира предъявляемым требованием и согласия с ними.
Экипаж воздушного судна, несмотря на приобретение места в ряду выхода, имеет право потребовать, чтобы Вы освободили место в ряду выхода, если это будет сочтено необходимым в интересах безопасности или если Вы не отвечаете каким-либо другим требованиям.
При этом стоимость услуги не возвращается!
Изменение услуги, возврат
Возврат денежных средств, оплаченных за услугу, производится по месту приобретения услуги при обращении пассажира за 3 часа до вылета рейса по расписанию.
Изменение пассажиром выбранного места после оплаты услуги не производится. Для изменения места производится возврат и оформление новой услуги.
Способ получения возврата стоимости услуги определяется в соответствии со способом оплаты услуги при покупке.
Заявление на аннулирование предварительно выбранного места в салоне воздушного судна и возврат денежных средств, оплаченного на сайте авиакомпании belavia.by, находится здесь
| 1. | АБДЕЛЬ МУНЕМ АМАЛИЯ САЛЕМОВНА |
| 2. | АБРАМОВ ИВАН АРТЕМОВИЧ |
| 3. | АНДРЕЕВСКИЙ НИКИТА ЭРНЕСТОВИЧ |
| 4. | АНТОНОВА СОФИЯ ИВАНОВНА |
| 5. | АРИСТОВА ВАСИЛИССА АНАТОЛЬЕВНА |
| 6. | АФАНАСЬЕВА ПОЛИНА СЕРГЕЕВНА |
| 7. | АФИНОГЕНТОВА АЛЕКСАНДРА ВИКТОРОВНА |
| 8. | БАЙ ПЁТР АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 9. | БАЙТЛЕР МАКСИМ ОЛЕГОВИЧ |
| 10. | БАКЛАНОВА УЛЬЯНА РУСЛАНОВНА |
| 11. | БАРСЕГЯН ГЕОРГИЙ ЭРНЕСТОВИЧ |
| 12. | БАТ ТАХЛЮСТАН БЕРСИС ХАДИЕВИЧ |
| 13. | БАТТАЛОВА ЯНА ИГОРЕВНА |
| 14. | БАТЫРЕВ КИРИЛЛ КОНСТАНТИНОВИЧ |
| 15. | БЕЗБОРОДОВА АЛИНА ВЛАДИМИРОВНА |
| 16. | БЕЛОХА АНДРЕЙ ИЛЬИЧ |
| 17. | БЕШКАРЕВА ТАТЬЯНА СЕРГЕЕВНА |
| 18. | БИКБАЕВА АЛИНА ФАНИСОВНА |
| 19. | БИЛЫК СТЕПАН АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 20. | БИНКОВ ЭМИЛЬ КАМИЛЕВИЧ |
| 21. | БИТАНОВА ВИКТОРИЯ АРТЕМОВНА |
| 22. | БЛИННИКОВА ДАРЬЯ АНДРЕЕВНА |
| 23. | БОГДАНОВА АЛЕКСАНДРА ПАВЛОВНА |
| 24. | БОЛДЫРЕВ АЛЕКСАНДР НИКОЛАЕВИЧ |
| 25. | БОЛЫШЕВА ВАЛЕРИЯ СТАНИСЛАВОВНА |
| 26. | БОРОВИКОВ ВЛАДИМИР НИКОЛАЕВИЧ |
| 27. | БУРОВ СЕРГЕЙ АНДРЕЕВИЧ |
| 28. | БЫЛИНКИН ДМИТРИЙ АНДРЕЕВИЧ |
| 29. | ВАНИНА АНЖЕЛИКА ИВАНОВНА |
| 30. | ВАСИЛЬЕВА АЛИСА МАКСИМОВНА |
| 31. | ВДОВЧЕНКО НИКИТА КИРИЛЛОВИЧ |
| 32. | ВИНОГРАДОВ РОДИОН АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 33. | ВОЛОВНИКОВА ИРИНА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 34. | ВОРОНЕНКОВ АНДРЕЙ ВЯЧЕСЛАВОВИЧ |
| 35. | ГАВРИКОВА ЮЛИЯ ИГОРЕВНА |
| 36. | ГАЙВОРОНСКИЙ МАКСИМ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 37. | ГАМОВА ДАРЬЯ ВИКТОРОВНА |
| 38. | ГОЛУБЕВА ВИКТОРИЯ ИГОРЕВНА |
| 39. | ГОЛУБЦОВА СОФЬЯ СЕРГЕЕВНА |
| 40. | ГОНЧАРЕНКО АЛЕКСАНДР АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 41. | ГОРЛОВ ИЛЬЯ ВИКТОРОВИЧ |
| 42. | ГОРНОВА ЕЛИЗАВЕТА СЕРГЕЕВНА |
| 43. | ГРЕБЕНКИНА АНАСТАСИЯ АЛЕКСЕЕВНА |
| 44. | ГРИГОРЬЕВА АГНИЯ СЕРГЕЕВНА |
| 45. | ГРИЦЕНКО ВАЛЕРИЙ ВИТАЛЬЕВИЧ |
| 46. | ГУСЕЛЬНИКОВ ПАВЕЛ ИЛЬИЧ |
| 47. | ДЕРНОВ ГЛЕБ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 48. | ДЗЮБА МАКСИМ АНДРЕЕВИЧ |
| 49. | ДУБОВ ЛЕОНИД АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 50. | ЕГОРОВА ЯРОСЛАВА ЕВГЕНЬЕВНА |
| 51. | ЕЛИСЕЕВА АЛЕКСАНДРА АЛЕКСЕЕВНА |
| 52. | ЕФИМЕНКО ЛЕОНИД АНДРЕЕВИЧ |
| 53. | ЖАНДАРМОВА ВЕРОНИКА ИГОРЕВНА |
| 54. | ЗАГАЙНОВА ЕВГЕНИЯ АЛЕКСАНДРОВНА |
| 55. | ЗАГОРСКАЯ КАРИНА СЕРГЕЕВНА |
| 56. | ЗАКИРОВА КАРИНА МАРАТОВНА |
| 57. | ЗАХАРОВ МАКСИМ ДМИТРИЕВИЧ |
| 58. | ЗВЕРЕВА АЛЕКСАНДРА МИХАЙЛОВНА |
| 59. | ЗОЛОТУХИНА АНАСТАСИЯ ДМИТРИЕВНА |
| 60. | ИВАКИНА КСЕНИЯ ВЛАДИМИРОВНА |
| 61. | ИВАНОВ ТИМУР ЭДУАРДОВИЧ |
| 62. | ИВАНОВА ЕЛЕНА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 63. | ИВАНОВА ТАТЬЯНА ВИТАЛЬЕВНА |
| 64. | ИВАЩЕНКО НИКИТА АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 65. | ИВЧЕНКО ВАЛЕРИЙ ПАВЛОВИЧ |
| 66. | ИГНАТОВ ЕВГЕНИЙ ЕВГЕНЬЕВИЧ |
| 67. | КАЗИМИРОВА АНГЕЛИНА АНТОНОВНА |
| 68. | КАЛИНОВА АЛЕКСАНДРА ЕВГЕНЬЕВНА |
| 69. | КАРАКЧИЕВА АНАСТАСИЯ ОЛЕГОВНА |
| 70. | КАРПОВ МАТВЕЙ СЕРГЕЕВИЧ |
| 71. | КЕШЕК АННА КОНСТАНТИНОВНА |
| 72. | КИЛЬДИЯРОВ ТИМУР ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 73. | КИМ КАРИНА ГЕННАДЬЕВНА |
| 74. | КЛОЧКОВА КСЕНИЯ ЭДУАРДОВНА |
| 75. | КОВАЛЬЧУК МАРИЯ СЕРГЕЕВНА |
| 76. | КОЗЕЕВА АННА СЕРГЕЕВНА |
| 77. | КОНОВАЛОВА ОЛЬГА АНАТОЛЬЕВНА |
| 78. | КОРОСТЕЛЁВА ЕЛЕНА РОМАНОВНА |
| 79. | КОТОВА МАРИНА ВЯЧЕСЛАВОВНА |
| 80. | КОШКИН МАКСИМ АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 81. | КРАВЧЕНКО АРТЕМ ЕГОРОВИЧ |
| 82. | КРАВЧЕНКО ЕКАТЕРИНА ГРИГОРЬЕВНА |
| 83. | КРИСАНОВ АНДРЕЙ ВАСИЛЬЕВИЧ |
| 84. | КУДИНОВ ДЕНИС ИВАНОВИЧ |
| 85. | КУДИНОВА ЕКАТЕРИНА ИВАНОВНА |
| 86. | КУЗЬМИНА КРИСТИНА СЕРГЕЕВНА |
| 87. | КУКЛИНА ДАРЬЯ АЛЕКСАНДРОВНА |
| 88. | КУЛЕМЕТЬЕВ ИВАН ДЕНИСОВИЧ |
| 89. | КУНИНА ЕЛИЗАВЕТА ИГОРЕВНА |
| 90. | КУЧЕРЕНКО ЕГОР ВИКТОРОВИЧ |
| 91. | ЛАНЕЦ ТАТЬЯНА ВИКТОРОВНА |
| 92. | ЛАПТЕВА АННА РОМАНОВНА |
| 93. | ЛАПШОВ АРСЕНИЙ ПАВЛОВИЧ |
| 94. | ЛАШИНА ЕЛИЗАВЕТА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 95. | ЛАШНЕВ ГЛЕБ БОРИСОВИЧ |
| 96. | ЛЕЗИНА ЕВГЕНИЯ АЛЕКСЕЕВНА |
| 97. | ЛЕКАРЬ АЛЕКСАНДР ПЕТРОВИЧ |
| 98. | ЛИ АЛЕКСЕЙ ЕВГЕНЬЕВИЧ |
| 99. | ЛИМОРОВА МАРИЯ ДМИТРИЕВНА |
| 100. | ЛИТВИНОВА КРИСТИНА ВЛАДИСЛАВОВНА |
| 101. | ЛИЧАК ЕГОР МАТВЕЕВИЧ |
| 102. | ЛОГУНОВ АЛЕКСЕЙ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 103. | ЛУКАЧЕВА СОФИЯ МАКСИМОВНА |
| 104. | ЛУКЬЯНОВ ПЕТР СЕРГЕЕВИЧ |
| 105. | ЛУКЬЯНОВА ВЛАДА АНДРЕЕВНА |
| 106. | ЛУКЬЯНОВА ТАТЬЯНА ЕГОРОВНА |
| 107. | ЛУНЕВА КСЕНИЯ ВЛАДИМИРОВНА |
| 108. | ЛУНЬКОВ ИВАН СЕРГЕЕВИЧ |
| 109. | ЛЮБОВИНКИН ЕГОР АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 110. | ЛЯХОВОЙ КИРИЛЛ ДМИТРИЕВИЧ |
| 111. | МАКЕЕВА АЛИНА АЛЕКСЕЕВНА |
| 112. | МАКЕЕВА ВИКТОРИЯ ЕВГЕНЬЕВНА |
| 113. | МАНГОВ МИЛОРАД КОНСТАНТИНОВИЧ |
| 114. | МАРКОВА ДИАНА ИЛЬИНИЧНА |
| 115. | МАСЛОВ ОЛЕГ ИВАНОВИЧ |
| 116. | МАУРИНА ЕВГЕНИЯ АНДРЕЕВНА |
| 117. | МЕЩЕРЯКОВА ЕЛИЗАВЕТА АНДРЕЕВНА |
| 118. | МИРЗАЕВА САБИНА ЭЛМАГ-КЫЗЫ |
| 119. | МИХАЙЛОВ ДМИТРИЙ ЭДУАРДОВИЧ |
| 120. | МИХЕЕВА СОФИЯ РОМАНОВНА |
| 121. | МОЛОХОВ ИЛЬЯ АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 122. | МОРГУНОВА МАРГАРИТА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 123. | МОРОЗОВ ДАНИЛА ПАВЛОВИЧ |
| 124. | МУХИН ДМИТРИЙ ВЯЧЕСЛАВОВИЧ |
| 125. | МУШНИКОВ АЛЕКСАНДР ВИКТОРОВИЧ |
| 126. | НАДТОКА АРТЕМ ВЯЧЕСЛАВОВИЧ |
| 127. | НАЗАРОВ СЕРГЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 128. | НЕБАЙКИНА АНАСТАСИЯ ЕВГЕНЬЕВНА |
| 129. | НЕЧАЕВА АЛИНА МАКСИМОВНА |
| 130. | НИШУКОВА МАРИЯ АЛЕКСАНДРОВНА |
| 131. | НОВИКОВА ВЕРОНИКА АЛЕКСЕЕВНА |
| 132. | НОСАЧ ЕГОР АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 133. | ОВАКИМЯН СОФЬЯ АНДРЕЕВНА |
| 134. | ОВЧАРЕНКО ИВАН АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 135. | ОВЧИННИКОВ ЕГОР ВАСИЛЬЕВИЧ |
| 136. | ОВЧИННИКОВА УЛЬЯНА ИЛЬИНИЧНА |
| 137. | ОХЛОПКОВ ИЛЬЯ ИГОРЕВИЧ |
| 138. | ПАВЛОВА ЕЛИЗАВЕТА АНДРЕЕВНА |
| 139. | ПАПУШКИНА АНАСТАСИЯ АЛЕКСЕЕВНА |
| 140. | ПЕРЕКИНА ЕЛЕНА АЛЕКСЕЕВНА |
| 141. | ПЕТРОВ КИРИЛЛ ВАЛЕРЬЕВИЧ |
| 142. | ПЕЧЕНКИНА ЕВА ВЯЧЕСЛАВОВНА |
| 143. | ПОДЛЯГИН ВЛАДИМИР АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 144. | ПОДРЕЗОВ ГЕОРГИЙ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 145. | ПОНОМАРЕВ НИКИТА АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 146. | ПОПОВ ЮРИЙ МИХАЙЛОВИЧ |
| 147. | ПОРУГОВА МАРИЯ СЕРГЕЕВНА |
| 148. | ПРИВАЛОВ НИКОЛАЙ НИКОЛАЕВИЧ |
| 149. | ПРУДНИКОВА НАДЕЖДА АЛЕКСЕЕВНА |
| 150. | ПЯТНИЦЕВ МИХАИЛ ВАЛЕРЬЕВИЧ |
| 151. | РАТИН АЛЕКСЕЙ СТАНИСЛАВОВИЧ |
| 152. | РЕЗНИК КСЕНИЯ ДМИТРИЕВНА |
| 153. | РОЗОВ ТИМОФЕЙ ПАВЛОВИЧ |
| 154. | РОМАНКОВА АРИНА ВАДИМОВНА |
| 155. | РОМАНЧУК АРТЁМ ДМИТРИЕВИЧ |
| 156. | РОМАШИН ИВАН АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 157. | РУБЦОВ ДМИТРИЙ АНДРЕЕВИЧ |
| 158. | РЫКАЛИНА УЛЬЯНА СЕРГЕЕВНА |
| 159. | РЯБОВА ЮЛИЯ ВЛАДИМИРОВНА |
| 160. | САБИРОВ ИЛЬДАР РУСТАМОВИЧ |
| 161. | САВЕЛЬЕВА ИРИНА АНТОНОВНА |
| 162. | САВИНЫХ ЕКАТЕРИНА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 163. | САВУШКИН МАКСИМ АНТОНОВИЧ |
| 164. | САВЧЕНКОВА ДАЙАНА ВЛАДИМИРОВНА |
| 165. | САВЧУК ГЕОРГИЙ ИЛЬИЧ |
| 166. | САПОЖНИКОВА ВИКТОРИЯ АЛЕКСЕЕВНА |
| 167. | САХАРОВА ЕКАТЕРИНА СЕРГЕЕВНА |
| 168. | СВЕТАНКОВА ВАРВАРА СТЕПАНОВНА |
| 169. | СВЕШНИКОВ ДАНИИЛ ВИКТОРОВИЧ |
| 170. | СЕРГЕЕВА КСЕНИЯ АЛЕКСЕЕВНА |
| 171. | СИНЯКОВА ВАСИЛИСА ЕВГЕНЬЕВНА |
| 172. | СКРЕПКОВ ДМИТРИЙ ДМИТРИЕВИЧ |
| 173. | СЛЕПНЕВА АННА СЕРГЕЕВНА |
| 174. | СЛЫШКИНА АННА ВАДИМОВНА |
| 175. | СМИРНОВ КОНСТАНТИН ЮРЬЕВИЧ |
| 176. | СОКОЛОВА СВЕТЛАНА ВИТАЛЬЕВНА |
| 177. | СОЛДАТЕНКОВ ТИМОФЕЙ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 178. | СОЛОВЕЙ АРИНА РОМАНОВНА |
| 179. | СОРОКИНА КРИСТИНА ВЯЧЕСЛАВОВНА |
| 180. | СТАРОВОЙТОВ ЕГОР АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 181. | СУВОРОВ АНДРЕЙ ДМИТРИЕВИЧ |
| 182. | СЮНЯКОВА САФИЯ МАРАТОВНА |
| 183. | ТАРАН ЕКАТЕРИНА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 184. | ТАРАСОВ ЗАХАР АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 185. | ТАРАСОВА АННА АЛЕКСЕЕВНА |
| 186. | ТВЕРСКИХ АНДРЕЙ РОМАНОВИЧ |
| 187. | ТЕТЕРИНА МАРИЯ ВАДИМОВНА |
| 188. | ТИХОНОВА ОЛЬГА НИКОЛАЕВНА |
| 189. | ТРЕЕВ РОМАН ИВАНОВИЧ |
| 190. | ТСИЗМАЛИДИ ВАСИЛИЙ ЮРЬЕВИЧ |
| 191. | ТУМАРЕВ АЛЕКСАНДР СЕРГЕЕВИЧ |
| 192. | УЖУЕВ ИСЛАМУТДИН КАМАЛУТДИНОВИЧ |
| 193. | ФАТЕЕВА СОФЬЯ НИКОЛАЕВНА |
| 194. | ФАХРУТДИНОВ РАФИЛЬ РАФИКОВИЧ |
| 195. | ФЕФЕЛОВ МИХАИЛ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 196. | ФИЛИМОНОВА КИРА БОГДАНОВНА |
| 197. | ХАЙРУТДИНОВ АНВАР ЛЕНАРОВИЧ |
| 198. | ХАЛИУЛЛИНА ДАРЬЯ РУСЛАНОВНА |
| 199. | ХАПТАХАЕВА СОФЬЯ АРСЕНТЬЕВНА |
| 200. | ХАСАНОВ ДАНИЛ САЛАВАТОВИЧ |
| 201. | ХАУСТОВ МАРК ФРИДОВИЧ |
| 202. | ХЛОПКИНА ЕЛИЗАВЕТА ВЛАДИМИРОВНА |
| 203. | ЦАРЬКОВА ЮЛИЯ ИГОРЕВНА |
| 204. | ЦЫБЕНКО ДМИТРИЙ СЕРГЕЕВИЧ |
| 205. | ЧЕБОТАРЕВ ДАНИЛ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 206. | ЧЕРНЫШОВ ДАНИИЛ АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 207. | ЧУБАРОВ СЕРГЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 208. | ЧУПРУНОВА ЕЛИЗАВЕТА АЛЕКСЕЕВНА |
| 209. | ШАЛЫГИНА ЕКАТЕРИНА ДМИТРИЕВНА |
| 210. | ШАЛЬНЕВ ДМИТРИЙ МИХАЙЛОВИЧ |
| 211. | ШАРАПОВ МАКСИМ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 212. | ШАФРАНОВ МАРК АНДРЕЕВИЧ |
| 213. | ШАХОВ ВАСИЛИЙ СЕРГЕЕВИЧ |
| 214. | ШАШКОВ МИХАИЛ МАКСИМОВИЧ |
| 215. | ШЕВЧЕНКО АННА СЕРГЕЕВНА |
| 216. | ШЕВЧУКОВА МАРИЯ СЕРГЕЕВНА |
| 217. | ШИМБАРЕВА ВАЛЕРИЯ АЛЕКСЕЕВНА |
| 218. | ШПОЛЬВИНД НИКИТА АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 219. | ШУГАЕВ ИОАНН ИЛЬИЧ |
| 220. | ШУПТА АНДРЕЙ ЮРЬЕВИЧ |
| 1. | АВЕТИСЯН ТИГРАН РУДИКОВИЧ |
| 2. | АЛЧИНОВА ЕКАТЕРИНА ОЛЕГОВНА |
| 3. | АНИСИМОВ НИКИТА АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 4. | АНИЩЕНКО АЛЕКСАНДР ВИТАЛЬЕВИЧ |
| 5. | АНТОНЕВИЧ КОНСТАНТИН КОНСТАНТИНОВИЧ |
| 6. | АРУТЮНЯН АРСЕНТИЙ СЕРГЕЕВИЧ |
| 7. | АРХАНГЕЛЬСКИЙ МАКСИМ АНДРЕЕВИЧ |
| 8. | АСТАХОВ ВИТАЛИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 9. | АФАНАСЬЕВА ПОЛИНА СЕРГЕЕВНА |
| 10. | АХТАРИЕВ АНДРЕЙ ДЕНИСОВИЧ |
| 11. | БАДАМШИНА СОФЬЯ ЮРЬЕВНА |
| 12. | БАЙРАМОВ ИСКАНДЕР ТАЛГАТОВИЧ |
| 13. | БАННИКОВА ЕЛИЗАВЕТА СЕРГЕЕВНА |
| 14. | БАРАНОВА АРИНА СЕРГЕЕВНА |
| 15. | БАРДАДИН ИЛИЯ АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 16. | БАРСЕГЯН ГЕОРГИЙ ЭРНЕСТОВИЧ |
| 17. | БЕЛОВА АНАСТАСИЯ АНДРЕЕВНА |
| 18. | БЕРЮХОВ НИКИТА ИГОРЕВИЧ |
| 19. | БИКБАЕВА АЛИНА ФАНИСОВНА |
| 20. | БОБЛАК НИНА ИГОРЕВНА |
| 21. | БОГОРОДСКИЙ ДМИТРИЙ ИВАНОВИЧ |
| 22. | БОНДАРЕНКО ВСЕВОЛОД МИХАЙЛОВИЧ |
| 23. | БОНДАРУК НИКИТА АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 24. | БОРОЗЕНЕЦ АЛИНА ИГОРЕВНА |
| 25. | БОЧКОВА МАРИЯ АНДРЕЕВНА |
| 26. | БРЫЗГАЛИН ДАНИЛА МИХАЙЛОВИЧ |
| 27. | БУГРЕЙ ПАВЕЛ СЕРГЕЕВИЧ |
| 28. | БУЛАВИНЦЕВА ЕЛИЗАВЕТА АЛЕКСЕЕВНА |
| 29. | БУРЛОВ СТАНИСЛАВ РОМАНОВИЧ |
| 30. | БУРОВ СЕРГЕЙ АНДРЕЕВИЧ |
| 31. | БУРЯК АЛЕКСАНДР ЮРЬЕВИЧ |
| 32. | БУШНЕВА ТАТЬЯНА ДМИТРИЕВНА |
| 33. | БЫЛИНКИН ДМИТРИЙ АНДРЕЕВИЧ |
| 34. | ВАРЧЕНКО ВАЛЕРИЙ СЕРГЕЕВИЧ |
| 35. | ВАСИЛЕВА АННА ЯРОСЛАВОВНА |
| 36. | ВАСИЛЁНОК ЕЛИЗАВЕТА ВЛАДИСЛАВОВНА |
| 37. | ВАХИТОВА СИРИНА ИЛДАРОВНА |
| 38. | ВЕРГАСОВ ДАНИЛА ЮРЬЕВИЧ |
| 39. | ВИКТОРОВИЧ ТИМУР СЕРГЕЕВИЧ |
| 40. | ВИСКУНОВ ДАНИЛ АНДРЕЕВИЧ |
| 41. | ВИХРОВА ЕКАТЕРИНА АНДРЕЕВНА |
| 42. | ВОЕЙКО АНДРЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 43. | ВОЛГИН ГЛЕБ ИЛЬИЧ |
| 44. | ВОЛКОВА АННА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 45. | ВОЛКОВА ЕЛИЗАВЕТА ВАСИЛЬЕВНА |
| 46. | ВОЛОГДИН МАРК ДАНИЛОВИЧ |
| 47. | ВОЛОГИНА ЕКАТЕРИНА ДМИТРИЕВНА |
| 48. | ВОЛОДАРСКАЯ ПОЛИНА ВАДИМОВНА |
| 49. | ВОРОНКОВИЧ ЯН МИХАЙЛОВИЧ |
| 50. | ВУНШ МАРГАРИТА АНДРЕЕВНА |
| 51. | ГАЛИМАРДАНОВ ВАДИМ ИЛЬМИРОВИЧ |
| 52. | ГАЛИМОВА ВАЛЕРИЯ МАРАТОВНА |
| 53. | ГАЛИУЛЛИНА АДЕЛИЯ РУСТАМОВНА |
| 54. | ГАЛЬЧЕНКО ЛИДИЯ ДМИТРИЕВНА |
| 55. | ГАРАЙШИН РОБЕРТ ИЛЬДАРОВИЧ |
| 56. | ГЕВОРГЯН НАРЕК АРАМОВИЧ |
| 57. | ГЕДИЕВ РАМАЗАН ГИЛЯСТАНОВИЧ |
| 58. | ГЕРАСЬКИН НИКИТА АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 59. | ГЛУЩЕНКО АЛЬБИНА ГРИГОРЬЕВНА |
| 60. | ГОРБАЧ ЮЛИЯ СЕРГЕЕВНА |
| 61. | ГОРБАЧЕНКО ДАНИИЛ ФЁДОРОВИЧ |
| 62. | ГОРДЕЕВА АННА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 63. | ГРЕБЕНЕВ АНТОН СЕРГЕЕВИЧ |
| 64. | ГРЕЧУХИНА МАРИЯ МАКСИМОВНА |
| 65. | ГРИГОРЯН АРТЁМ ГАРЕГИНОВИЧ |
| 66. | ГРИНЁВ ФИЛИПП ПЕТРОВИЧ |
| 67. | ГРИЩЕНКО МАКСИМ ВЯЧЕСЛАВОВИЧ |
| 68. | ГРОМОВ АРТЁМ РОМАНОВИЧ |
| 69. | ГУБАНОВ ЕГОР СЕРГЕЕВИЧ |
| 70. | ГЮЛАЛИЕВ ТИМУР АРАЗОВИЧ |
| 71. | ДАНИЛЬЧИК АРТЁМ ВЛАДИСЛАВОВИЧ |
| 72. | ДАНЬЯРОВ АСКАР БЕРКАЛИЕВИЧ |
| 73. | ДЕДЮКИНА СОФИЯ КИРИЛЛОВНА |
| 74. | ДМИТРИЕВА КСЕНИЯ ДМИТРИЕВНА |
| 75. | ДОДОНОВ ВЛАДИСЛАВ ОЛЕГОВИЧ |
| 76. | ЕВМЕНОВА СОФЬЯ АНДРЕЕВНА |
| 77. | ЕВСТАФЬЕВ АРТЁМ СЕРГЕЕВИЧ |
| 78. | ЕМЕЛЬЯНОВА АНАСТАСИЯ КОНСТАНТИНОВНА |
| 79. | ЕРМАКОВА СВЕТЛАНА ДЕНИСОВНА |
| 80. | ЕФРЕМОВА МАРИЯ АНДРЕЕВНА |
| 81. | ЖИДЕЛЕВ АРТЁМ АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 82. | ЖУК МАРИНА ЮРЬЕВНА |
| 83. | ЖУКОВ АЛЕКСЕЙ МИХАЙЛОВИЧ |
| 84. | ЖУРОВ ВЛАДИСЛАВ ВАЛЕРЬЕВИЧ |
| 85. | ЗАБОЛОЦКИЙ АРТЁМ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 86. | ЗАВЬЯЛОВ МИХАИЛ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 87. | ЗАГАЙНОВ АРТЕМИЙ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 88. | ЗАГАЙНОВ СЕРГЕЙ ДМИТРИЕВИЧ |
| 89. | ЗАЙЦЕВ АЛЕКСАНДР ОЛЕГОВИЧ |
| 90. | ЗАЙЦЕВА МАРИЯ СЕРГЕЕВНА |
| 91. | ЗАКАЛЬСКАЯ КСЕНИЯ ВЯЧЕСЛАВОВНА |
| 92. | ЗАРИЦКИЙ МАКСИМ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 93. | ЗАХАРЧУК АЛИНА ВАДИМОВНА |
| 94. | ЗЕЛЕНЧУК ГЕОРГИЙ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 95. | ЗЕМЛЯКОВ ГРИГОРИЙ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 96. | ЗИАТДИНОВ НАИЛЬ РАВИЛЬЕВИЧ |
| 97. | ЗИЛЬБЕРШТЕЙН ПАВЕЛ ЕВГЕНЬЕВИЧ |
| 98. | ЗИННЯТУЛЛИН РИНАТ РАВИЛЕВИЧ |
| 99. | ЗОЛОТАРЕВА АНАСТАСИЯ СЕРГЕЕВНА |
| 100. | ЗУЕВ НИКОЛАЙ ВИКТОРОВИЧ |
| 101. | ЗЫКОВА ПОЛИНА ВЛАДИСЛАВОВНА |
| 102. | ИВАНОВ КОНСТАНТИН ОЛЕГОВИЧ |
| 103. | ИВАНОВА МАРИЯ АЛЕКСЕЕВНА |
| 104. | ИЖМЯКОВА ВИКТОРИЯ АЛЕКСЕЕВНА |
| 105. | ИЛЬИНА ИРИНА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 106. | ИОНИН АЛЕКСАНДР ИГОРЕВИЧ |
| 107. | ИОНИН ДАНИИЛ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 108. | ИПАТЕНКОВА ВИКТОРИЯ ВИТАЛЬЕВНА |
| 109. | КАБИСОВА СОФЬЯ ДМИТРИЕВНА |
| 110. | КАЛАШНИКОВА ЮЛИЯ АЛЕКСЕЕВНА |
| 111. | КАЛИНИН ЕФИМ СЕРГЕЕВИЧ |
| 112. | КАЛИНИНА АЛИНА ПАВЛОВНА |
| 113. | КАМЫЗИН АЛЕКСАНДР НИКОЛАЕВИЧ |
| 114. | КАНТА ДАНИЭЛЬ НУХУМОВИЧ |
| 115. | КАПИТОНОВ ДАНИЛ ДМИТРИЕВИЧ |
| 116. | КАРАПЕТЯНЦ ГЕОРГИЙ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 117. | КАРАСЕВ АЛЕКСАНДР ЕВГЕНЬЕВИЧ |
| 118. | КАРИМОВ МАЛИК РАФИСОВИЧ |
| 119. | КАРПОВИЧ ЛИДИЯ АЛЕКСАНДРОВНА |
| 120. | КАСАЕВ АРТЕМ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 121. | КАСИМОВ РУСЛАН ХУСНИТДИНОВИЧ |
| 122. | КАТКОВ ГЛЕБ ИГОРЕВИЧ |
| 123. | КАУНОВА АНГЕЛИНА АНДРЕЕВНА |
| 124. | КАШИН НИКИТА БОРИСОВИЧ |
| 125. | КЕЗИНА КСЕНИЯ ДМИТРИЕВНА |
| 126. | КИАЦЦА НАТАША ИЗАБЕЛЛА |
| 127. | КИРАЕВ БУЛАТ РУСТАМОВИЧ |
| 128. | КИРИЕНКО ДАНИЛ ДМИТРИЕВИЧ |
| 129. | КИСЛИЦЫН АЛЕКСЕЙ ДМИТРИЕВИЧ |
| 130. | КИЧЁВ АНТОН ЕВГЕНЬЕВИЧ |
| 131. | КЛЕЙМЕНОВ МАКСИМ ИГОРЕВИЧ |
| 132. | КЛИМЕНКО ДМИТРИЙ СЕРГЕЕВИЧ |
| 133. | КЛИМЕНОК ДАНИИЛ РУСЛАНОВИЧ |
| 134. | КЛЮЕВ НИКИТА СЕРГЕЕВИЧ |
| 135. | КНЯЗЕВ АНДРЕЙ АНДРЕЕВИЧ |
| 136. | КОЗЛОВ АЛЕКСАНДР АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 137. | КОЗЛОВ ВЛАДИМИР МИХАЙЛОВИЧ |
| 138. | КОЗЛОВ ДАНИЛА АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 139. | КОНДРАТЬЕВ ТИХОН НИКОЛАЕВИЧ |
| 140. | КОНЕВ АРТЁМ АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 141. | КОНОНОВА ВИКТОРИЯ СЕРГЕЕВНА |
| 142. | КОПЫТКОВ ДМИТРИЙ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 143. | КОРДЕНКОВ НИКОЛАЙ СЕРГЕЕВИЧ |
| 144. | КОРОЛЕВ ДМИТРИЙ ГЕННАДИЕВИЧ |
| 145. | КОСИЦЫН АРСЕНИЙ МАКСИМОВИЧ |
| 146. | КОТОВА МАРИНА ВЯЧЕСЛАВОВНА |
| 147. | КОШЕНСКИЙ ВАДИМ ИГОРЕВИЧ |
| 148. | КРАВЧЕНКО МИХАИЛ КОНСТАНТИНОВИЧ |
| 149. | КРИВУЛЯ ПОЛИНА ЮРЬЕВНА |
| 150. | КРИСАНОВ АНДРЕЙ ВАСИЛЬЕВИЧ |
| 151. | КРУГЛОВА АНГЕЛИНА АЛЕКСЕЕВНА |
| 152. | КРУПЕННИКОВА ДИАНА ЕВГЕНЬЕВНА |
| 153. | КРУТСКИХ АННА АНДРЕЕВНА |
| 154. | КРЮКОВ СЕРГЕЙ ДМИТРИЕВИЧ |
| 155. | КУЛЯСКИН МИХАИЛ ОЛЕГОВИЧ |
| 156. | ЛАВРЕНКОВА МАРИНА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 157. | ЛАПА КСЕНИЯ АНДРЕЕВНА |
| 158. | ЛЕБЕДЕВА СВЕТЛАНА ЮРЬЕВНА |
| 159. | ЛЕОНОВА ЮЛИЯ СЕРГЕЕВНА |
| 160. | ЛЕСНИКОВА АНАСТАСИЯ АНДРЕЕВНА |
| 161. | ЛИПАЕВА КСЕНИЯ СЕРГЕЕВНА |
| 162. | ЛИТВИНОВА КРИСТИНА ВЛАДИСЛАВОВНА |
| 163. | ЛИЯСОВ СЕРГЕЙ АНДРЕЕВИЧ |
| 164. | ЛОБАНОВ НИКИТА ДЕНИСОВИЧ |
| 165. | ЛОБУШКИН ЕГОР АНДРЕЕВИЧ |
| 166. | ЛОКТЕВ ДМИТРИЙ СТАНИСЛАВОВИЧ |
| 167. | ЛОМАКИН НИКИТА АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 168. | ЛУНЬКОВ ИВАН СЕРГЕЕВИЧ |
| 169. | ЛУТЧЕНКО ДМИТРИЙ ВИКТОРОВИЧ |
| 170. | ЛУШИНА АЛИСА РОМАНОВНА |
| 171. | ЛЫЖОВА ПОЛИНА ДМИТРИЕВНА |
| 172. | ЛЫСЕНКО ВИТАЛИЙ ВЯЧЕСЛАВОВИЧ |
| 173. | ЛЫСЕНКО ЕЛЕНА ДМИТРИЕВНА |
| 174. | МАКАРОВА МАРИЯ АЛЕКСАНДРОВНА |
| 175. | МАКЛЯКОВ ДМИТРИЙ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 176. | МАЛАХОВ АРТЁМ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 177. | МАЛОВ МАКСИМ СЕРГЕЕВИЧ |
| 178. | МАМАЕВА АРИНА ИГОРЕВНА |
| 179. | МАМЕДОВА АЛИНА РАФАИЛОВНА |
| 180. | МАНКИРОВ ЭРДНИ ВИКТОРОВИЧ |
| 181. | МАСАСИНА АНАСТАСИЯ ЕВГЕНЬЕВНА |
| 182. | МАСЛЕННИКОВА ВАСИЛИСА АНДРЕЕВНА |
| 183. | МАСЛЯКОВ АЛЕКСАНДР ОЛЕГОВИЧ |
| 184. | МАСЮТИН ПЕТР НИКОЛАЕВИЧ |
| 185. | МАХМУДОВ ХАМЗАТ РИЗВАНОВИЧ |
| 186. | МЕЛЬНИКОВА ЛАДА СЕРГЕЕВНА |
| 187. | МЕЛЬНИЧЕНКО НИКИТА ВИКТОРОВИЧ |
| 188. | МЕФЕД ДАРЬЯ ЕВГЕНЬЕВНА |
| 189. | МИНГАЗОВА АЙГУЛЬ РУСТЕМОВНА |
| 190. | МИРОНОВ ГОРДЕЙ ВИТАЛЬЕВИЧ |
| 191. | МИФТАХУТДИНОВ ЭМИЛЬ КАМИЛОВИЧ |
| 192. | МИШАНИН ОЛЕГ ВЛАДИСЛАВОВИЧ |
| 193. | МИШУНИН ИВАН СЕРГЕЕВИЧ |
| 194. | МОЖАРОВ ЯРОСЛАВ МИХАЙЛОВИЧ |
| 195. | МОЛЧАНОВ ВЛАДИСЛАВ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 196. | МОРОЗОВ ИВАН ПАВЛОВИЧ |
| 197. | МУДЖИКОВ ВЛАДИСЛАВ ДЖАНГАРОВИЧ |
| 198. | МУЛИНЦЕВА АЛИНА ДМИТРИЕВНА |
| 199. | МЯСНИКОВ ЯРОСЛАВ ИЛЬИЧ |
| 200. | НАГАЙНИКОВА АНАСТАСИЯ АЛЕКСЕЕВНА |
| 201. | НАЗАРОВ СЕРГЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 202. | НЕБАЙКИНА АНАСТАСИЯ ЕВГЕНЬЕВНА |
| 203. | НЕМОВА ЕВГЕНИЯ АЛЕКСАНДРОВНА |
| 204. | НЕМТЫРЕВ АРТЕМИЙ ОЛЕГОВИЧ |
| 205. | НЕРАДОВСКИЙ ДЕНИС ДМИТРИЕВИЧ |
| 206. | НИКИТЕНКО НИКИТА АНДРЕЕВИЧ |
| 207. | НИКОЛИН ВЛАДИСЛАВ АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 208. | НИКУЛИНА МАРИЯ АЛЕКСАНДРОВНА |
| 209. | НИКУЛИНА СОФИЯ СТЕПАНОВНА |
| 210. | ОБЕХОВ АЛЕКСАНДР ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 211. | ОВСЯННИКОВ ИВАН РОМАНОВИЧ |
| 212. | ОСИПОВА ЕЛИЗАВЕТА АНДРЕЕВНА |
| 213. | ПАВЛИНСКИЙ ЛЕВ РОМАНОВИЧ |
| 214. | ПАВЛОВ ВСЕВОЛОД АНДРЕЕВИЧ |
| 215. | ПАВЛОВ РОБЕРТ МАКСИМОВИЧ |
| 216. | ПАВЛУШИНА УЛЬЯНА АЛЕКСЕЕВНА |
| 217. | ПАЛЕХОВА АЛЁНА ВАДИМОВНА |
| 218. | ПАСЫНКОВ РОДИОН БОРИСОВИЧ |
| 219. | ПАЧКОВСКИЙ СТЕПАН АНДРЕЕВИЧ |
| 220. | ПАЩЕНКОВА ВАЛЕРИЯ ДМИТРИЕВНА |
| 221. | ПЕТРОВА СОФЬЯ ИГОРЕВНА |
| 222. | ПИСКУН АРТЁМ МАКСИМОВИЧ |
| 223. | ПЛОТНИКОВА АНАСТАСИЯ СЕРГЕЕВНА |
| 224. | ПОГОРЕЛЬСКИЙ ВИТАЛИЙ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 225. | ПОЛЮХОВИЧ АЛЁНА ИГОРЕВНА |
| 226. | ПОНОМАРЕВА МАРИЯ АНДРЕЕВНА |
| 227. | ПОНОМАРЕВА ЭМИЛИЯ ВИКТОРОВНА |
| 228. | ПОПОВ АРТЕМИЙ ДМИТРИЕВИЧ |
| 229. | ПОПОВ ЮРИЙ МИХАЙЛОВИЧ |
| 230. | ПОРСИНА АЛЕКСАНДРА АЛЕКСЕЕВНА |
| 231. | ПОТАПОВ АНДРЕЙ ВЯЧЕСЛАВОВИЧ |
| 232. | ПРАКАШ АРЬЯ АКХИЛОВНА |
| 233. | ПРИВАЛОВ НИКОЛАЙ НИКОЛАЕВИЧ |
| 234. | ПРИВАЛОВА КАМИЛЛА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 235. | ПРОКОПЕНКО ВЛАДИМИР АНДРЕЕВИЧ |
| 236. | ПРОКОПЕНКО РОМАН ДМИТРИЕВИЧ |
| 237. | ПРОКОПОВ ИВАН АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 238. | ПУСТАРНАК МАРИЯ КОНСТАНТИНОВНА |
| 239. | ПУТИЛИН АНДРЕЙ СЕРГЕЕВИЧ |
| 240. | ПУШКАРЕВА ЕКАТЕРИНА КОНСТАНТИНОВНА |
| 241. | ПШЕНИЧНЫЙ ТИМОФЕЙ ВИТАЛЬЕВИЧ |
| 242. | ПЫЖОВА ПОЛИНА СЕРГЕЕВНА |
| 243. | РАВОДИНА АЛЕКСАНДРА МИХАЙЛОВНА |
| 244. | РАЙГОРОДЕЦКАЯ ИРИНА ИГОРЕВНА |
| 245. | РАКОВА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 246. | РОМАНОВ ЯРОСЛАВ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 247. | РОМАНОВА ВАЛЕНТИНА ОЛЕГОВНА |
| 248. | РОМАНЮК ПОЛИНА ДМИТРИЕВНА |
| 249. | РОМАШИНА КСЕНИЯ АЛЕКСЕЕВНА |
| 250. | РУДЕЕВ КИРИЛЛ АНДРЕЕВИЧ |
| 251. | РУДЕНСКИЙ ДМИТРИЙ ЕВГЕНЬЕВИЧ |
| 252. | РУДНЕВ НИКОЛАЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 253. | РУДНЕВА ИРИНА ВАЛЕРЬЕВНА |
| 254. | РЫЖКОВ ВИТАЛИЙ БОРИСОВИЧ |
| 255. | РЫСАЕВ АЙДАР ИЛЬДАРОВИЧ |
| 256. | САЛИМОВА АЛИНА РУСТАМОВНА |
| 257. | САМАРЕЦ СЕРГЕЙ ФИЛИППОВИЧ |
| 258. | САМОШОНКОВА ЕЛИЗАВЕТА НИКОЛАЕВНА |
| 259. | САРАПУЛОВ ЕВГЕНИЙ ЕВГЕНЬЕВИЧ |
| 260. | САХАРОВА ЕКАТЕРИНА СЕРГЕЕВНА |
| 261. | САХАРОВА ПОЛИНА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 262. | СЕДЫХ ПАВЕЛ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 263. | СЕЛЮНИН НИКИТА АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 264. | СЕМЕЙСКАЯ КСЕНИЯ |
| 265. | СЕМЕНОВ ИЛЬЯ ИВАНОВИЧ |
| 266. | СЕМЕНОВА НАТАЛИЯ КОНСТАНТИНОВНА |
| 267. | СЁМИН МИХАИЛ МАКСИМОВИЧ |
| 268. | СЕРГЕЕВ ДЕНИС ВЛАДИСЛАВОВИЧ |
| 269. | СЕРГЕЕВА СОФЬЯ СЕРГЕЕВНА |
| 270. | СЕРГЕЕВА УЛЬЯНА ВЛАДИМИРОВНА |
| 271. | СЕРЖАНТОВ АРТЕМИЙ ВЯЧЕСЛАВОВИЧ |
| 272. | СИВАЕВ ВЛАДИМИР АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 273. | СИВАК ВЯЧЕСЛАВ ВИТАЛЬЕВИЧ |
| 274. | СИМАКОВ АРТЕМ РОМАНОВИЧ |
| 275. | СИТНИКОВ АЛЕКСАНДР МИХАЙЛОВИЧ |
| 276. | СКАЖЕНИК НИКОЛАЙ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 277. | СОКОЛОВА МАРГАРИТА АНДРЕЕВНА |
| 278. | СОКОЛОВСКИЙ СЕРГЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 279. | СОЛОДКОВА ЕКАТЕРИНА АЛЕКСАНДРОВНА |
| 280. | СОЛОМИНА ЛИДИЯ АНДРЕЕВНА |
| 281. | СТАРКОВ АНДРЕЙ ВАСИЛЬЕВИЧ |
| 282. | СТАРКОВА ЭЛИНА АЛЕКСЕЕВНА |
| 283. | СТЕПАНОВА ЕЛИЗАВЕТА ИГОРЕВНА |
| 284. | СУЛТАНОВСКАЯ АЛЕКСАНДРА СТАНИСЛАВОВНА |
| 285. | СУМСКАЯ ПОЛИНА СЕРГЕЕВНА |
| 286. | ТЕРЕНТЬЕВА ВАЛЕНТИНА СЕРГЕЕВНА |
| 287. | ТЕСЛЯ ДАНИЛА СЕРГЕЕВИЧ |
| 288. | ТИХОНОВ ФЁДОР АНДРЕЕВИЧ |
| 289. | ТОЛЧИН ВЛАДИСЛАВ ПАВЛОВИЧ |
| 290. | ТОРОПЦЕВА СОФИЯ АЛЕКСЕЕВНА |
| 291. | ТРЕЕВ РОМАН ИВАНОВИЧ |
| 292. | ТРОНИНА СОФИЯ ГРИГОРЬЕВНА |
| 293. | ТРУБИЦИН АРСЕНИЙ КОНСТАНТИНОВИЧ |
| 294. | ТУНЕКОВ ТИМОФЕЙ АНДРЕЕВИЧ |
| 295. | ТУНИЯНЦ ДОМИНИКА АРАМОВНА |
| 296. | ТЮРИНА МАРИНА ДМИТРИЕВНА |
| 297. | УДОДОВ ИВАН АРКАДЬЕВИЧ |
| 298. | УМАНСКИЙ РОМАН АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 299. | УРАЗМЕТОВА МАРГАРИТА РУСЛАНОВНА |
| 300. | УРАЗОВА НАИЛЯ МАРАТОВНА |
| 301. | УТЕГЕНОВА ЛУИЗА САЛАВАТОВНА |
| 302. | ФЕДИЧКИНА АННА ДЕНИСОВНА |
| 303. | ФЕДОРОВ КОНСТАНТИН СЕРГЕЕВИЧ |
| 304. | ФЕДОРОВ РОМАН ВИКТОРОВИЧ |
| 305. | ФЕДОСЬКИН НИКИТА СЕРГЕЕВИЧ |
| 306. | ФЕДОТОВА АНАСТАСИЯ ЕВГЕНЬЕВНА |
| 307. | ФИЛИППОВ ДАНИЛ ВИТАЛЬЕВИЧ |
| 308. | ФОМИН КИРИЛЛ АЛЕКСАНДРОВИЧ |
| 309. | ФОНАРЕВА КСЕНИЯ ПАВЛОВНА |
| 310. | ФОНАРЕВА ОЛЬГА ЕВГЕНЬЕВНА |
| 311. | ФУКАЛОВА ЕКАТЕРИНА МАКСИМОВНА |
| 312. | ХАБИБОВА АСЯ ФАНУРОВНА |
| 313. | ХАРРАСОВ АЙРАТ ФАЙЗРАХМАНОВИЧ |
| 314. | ХОЛИНА ЕЛИЗАВЕТА АЛЕКСЕЕВНА |
| 315. | ХУДЕЕВ ИЛЬЯ СЕРГЕЕВИЧ |
| 316. | ЦАРЕГОРОДЦЕВ ИЛЬЯ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 317. | ЦВЕТКОВА ДАРЬЯ АЛЕКСАНДРОВНА |
| 318. | ЧАНОВ ГЛЕБ АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 319. | ЧЕКАЛИНА СВЕТЛАНА ДМИТРИЕВНА |
| 320. | ЧЕКМАЗОВА ЭЛИНА СЕРГЕЕВНА |
| 321. | ЧЕЛЫШЕВА ТАТЬЯНА АНДРЕЕВНА |
| 322. | ЧЕРКАСОВ ДАНИИЛ ВЛАДИСЛАВОВИЧ |
| 323. | ЧЕРНИКОВ ПАВЕЛ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 324. | ЧЕРНОВ НИКИТА СЕРГЕЕВИЧ |
| 325. | ЧЕТЫРКИНА АНАСТАСИЯ ИЛЬИНИЧНА |
| 326. | ЧУБАРОВ СЕРГЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ |
| 327. | ЧУЛАЕВСКИЙ АРТЕМ АРТАШЕСОВИЧ |
| 328. | ЧУНАЕВ ДМИТРИЙ АНДРЕЕВИЧ |
| 329. | ШАБАЛИН ДАНИЛА СЕРГЕЕВИЧ |
| 330. | ШАЛИМОВА ВИКТОРИЯ СЕРГЕЕВНА |
| 331. | ШАХОВ ВИТАЛИЙ СЕРГЕЕВИЧ |
| 332. | ШАХОВЦЕВ ЕГОР АЛЕКСЕЕВИЧ |
| 333. | ШАЯХМЕТОВА ДИАНА ТАГИРОВНА |
| 334. | ШЕЛГУНОВА НАТАЛЬЯ ВИТАЛЬЕВНА |
| 335. | ШЕЛЕПОВА АНАСТАСИЯ АНДРЕЕВНА |
| 336. | ШЕПИЛОВ ВЛАДИСЛАВ ДЕНИСОВИЧ |
| 337. | ШЕСТАКОВ ИЛЬЯ ВИКТОРОВИЧ |
| 338. | ШЕХАНОВ АЛЕКСЕЙ СЕРГЕЕВИЧ |
| 339. | ШИКАНЯН АЛИСА РОМАНОВНА |
| 340. | ШКУРАТОВ МИХАИЛ ОЛЕГОВИЧ |
| 341. | ШУДОБАЕВ ТИМУР СЕРИКОВИЧ |
| 342. | ШУМЛЯНСКАЯ АРИНА СЕРГЕЕВНА |
| 343. | ЭМИЛЬ КЫЗЫ ДИАНА |
| 344. | ЮСКО ЕВГЕНИЙ МИХАЙЛОВИЧ |
| 345. | ЯКОВЛЕВ ВАДИМ СЕРГЕЕВИЧ |
| 346. | ЯКОВЛЕВА КСЕНИЯ МАКСИМОВНА |
| 347. | ЯНКОВИЧ ИВАН ДАРКОВИЧ |
| 348. | ЯХИН ТИМУР ХАФИЗОВИЧ |
| 349. | ЯШЕВ МАЛИК РАСУЛОВИЧ |
Авиабилеты Кабин-Крик — Айсл-оф-Силли туда и обратно. Билеты на самолет Кабин-Крик
Дешевые авиабилеты из Кабин-Крик в Айсл-оф-Силли
Хотите купить билет на самолет из Кабин-Крик в Айсл-оф-Силли по самой низкой цене? Мы сравниваем цены на прямые рейсы Кабин-Крик — Айсл-оф-Силли и перелеты с пересадкой среди 750 авиакомпаний и агентств. Зачем зря тратить свое время на поиск, если есть более удобная возможность воспользоваться скидками, акциями и распродажами лоукостов через интернет. С помощью полного расписания самолетов Кабин-Крик — Айсл-оф-Силли вы быстро найдете нужный вариант перелета, уточните дни полетов и наличие авиабилетов на конкретную дату.Стоимость авиабилета Кабин-Крик — Айсл-оф-Силли
Cколько стоит билет на самолет до Айсл-оф-Силли из Кабин-Крик и как приобрести дешевле? У нас есть несколько рекомендаций, взятых из календаря лучших цен на авиабилеты по этому маршруту:2) Самые дешевые билеты на самолет CBZ — ISC доступны в среду и четверг. Как правило, на выходных они стоят дороже.
3) Выгодней сразу покупать билеты в обе стороны, чем туда и обратно по отдельности.
Полезная информация перед бронированием путешествия из Кабин-Крик в Айсл-оф-Силли
На нашем сервисе вы можете узнать:- Расстояние и длительность перелета (сколько лететь из Кабин-Крик в Айсл-оф-Силли?)
- Какие авиакомпании осуществляют прямые рейсы в Айсл-оф-Силли из Кабин-Крик
- У каких авиакомпаний самые дешевые билеты из Кабин-Крик в Айсл-оф-Силли
- Сколько длится перелет из Кабин-Крик в Айсл-оф-Силли
- Из каких аэропортов можно добраться в Айсл-оф-Силли из Кабин-Крик
На каком расстоянии Кабин-Крик от Айсл-оф-Силли?
От города Кабин-Крик до Айсл-оф-Силли 7288 км.Из каких аэропортов осуществляются перелеты по маршруту Кабин-Крик — Айсл-оф-Силли?
В городе Кабин-Крик: Кабин-Крик. В Айсл-оф-Силли — Сент-Мэрис, Треско.Пейзажи северного Вьетнама
В туре:
- старинный город ХАНОЙ – душа Вьетнама;
- захватывающие виды Бухты ХАЛОНГ;
- пейзажи живописной провинции НИНЬБИНЬ;
- Сапа — «горная столица» Северного Вьетнама и мир уникальных культур этнических народностей!
КРАТКИЙ МАРШРУТ:
1 день: прилет в Ханой
2 день: Ханой – Халонг (круиз с ночью на корабле) (завтрак, обед, ужин)
3 день: Халонг – НиньБинь (завтрак, обед)
4 день: НиньБинь – экскурсия «Чанг Ан + комплекс пагод Бай Динь» (завтрак, обед)
5 день: НиньБинь – экскурсия «Хоа Лы (Hoa Lư) и Национальный парк Там Кок» – Ханой – Лаокай (завтрак, обед)
6 день: Лаокай – Сапа (завтрак)
7 день: Сапа– Лаокай – Ханой (завтрак)
8 день: Ханой – обзорная экскурсия – трансфер в аэропорт
ОТЕЛИ ПО ПРОГРАММЕ:
ОТЕЛИ 3*:
|
Город |
Ночи |
Отель 3* |
Категория номера |
|
Ханой |
1 ночь |
Lenid 54 Tho Nhuom 4* |
Deluxe |
|
Халонг |
1 ночь |
Golden Lotus/ Bai Thocruise |
Standard Cabin |
|
НиньБинь |
2 ночи |
Bai Dinh Hotel |
Deluxe |
|
ПоездХаной -Лаокай |
2 ночи |
standard train |
Купе на 4 чел |
|
Сапа |
1 ночь |
Bamboo Sapa Hotel |
Standard |
ОТЕЛИ 4*:
|
Город |
Ночи |
Отель 4* |
Категория номера |
|
Ханой |
1 ночь |
Lenid 54 Tho Nhuom |
Deluxe |
|
Халонг |
1 ночь |
Garden Bay cruise |
DeluxeCabin |
|
НиньБинь |
2 ночи |
Cuc Phuong Resort 4* |
Bungalow Deluxe double |
|
ПоездХаной -Лаокай |
2 ночи |
standard train |
Купе на 4 чел |
|
Сапа |
1 ночь |
U Sapa |
Superior |
ОТЕЛИ 5*:
|
Город |
Ночи |
Отель 5* |
Категория номера |
|
Ханой |
1 ночь |
Movenpick Hotel |
Superior |
|
Халонг |
1 ночь |
Royal Wing cruise |
DeluxeCabin |
|
НиньБинь |
2 ночи |
Emeralda Resort |
Superior |
|
ПоездХаной -Лаокай |
2 ночи |
standard train |
Купе на 4 чел |
|
Сапа |
1 ночь |
Victoria Sapa 4*+ |
Superior |
*Отели по программе могут быть заменены на равнозначные
Программа тура на 7 ночей: |
|
| 1 день | Прилет в Ханой (аэропорт Noibai). Прохождение паспортного контроля. Встреча с русскоговорящим гидом.Ханой — столица и исторический центр Вьетнама, колыбель вьетнамской цивилизации. Ранее город носил название Тханг Лонг, что в переводе означает «Город Взл |
| 2 день |
Завтрак в отеле. 08:00: Переезд в бухту Халонг (время в пути — около 3,5 часа с остановкой на фабрике керамики). 12:00: Прибытие в Халонг. Залив Халонг — одно из природных чудес света, включен ЮНЕСКО в список международного достояния человечества. В этой живописной бухте расположено около 2000 больших и маленьких островков с причудливыми скальными образованиями, таинственными пещерами и гротами, мангровыми лесами. С бухтой Халонг связано много мифов и легенд. С вьетнамского языка слово Halong переводится как «место, где дракон погрузился в море». Легенда гласит, что острова бухты были созданы Великим Драконом, который жил в горах. Однажды пролетая над своими угодьями, Дракон хвостом зацепил горы и пробил в них лощины и впадины. В тот день, когда горы погрузились в море, места которые он задел хвостом заполнились водой, а на поверхности остались лишь маленькие островки. Сегодня – это Халонг Бэй. 12:30: Трансфер на причал. Размещение на корабле. Приветственный напиток. Прогулка на катере с посещением пещер. Купание на пляже острова Титов (если позволяет погода). Для любителей рыбалки бесплатно организуется ночная ловля кальмара. Обед и ужин на борту корабля. Ночь на корабле, стоящем на якоре в закрытом море в комфортной каюте (мягкая кровать, душевая с горячей водой, кондиционер). |
| 3 день |
Ранним утром перед завтраком у нас будет возможность встретить восход солнца на борту корабля. Утренняя гимнастика (по вьетнамской традиционной школе «Тайчи»). 7:30: Завтрак (шведский стол) на борту корабля. По желанию можно арендовать (до 2-х часов) каяк для катания по морю, между скалами, осмотр гротов и поиск таинственного залива «Приземлившегося Дракона». После завтрака на корабле, продолжение морской прогулки по направлению к берегу. Обед из морских деликатесов на борту. После обеда в 11:00 сдача номера и высадка на берег. 12:00: индивидуальный трансфер с русскоговорящим гидом в НиньБинь (Ninh binh). Время в пути примерно 3 часа. Размещение в отеле. Ночь в Нинь Бинь. |
| 4 день |
Завтрак в отеле. Встреча с гидом в 08.00. Экскурсия «Чанг Ан + комплекс пагод Бай Динь» (Ориентировочная продолжительность тура 7-8 часов)
Возвращение в отель. Ночь в НиньБинь. |
| 5 день |
После завтрака в отеле — встреча с гидом. В 08.00 начало экскурсии: «Хоа Лы (Hoa Lư) и Национальный парк Там Кок» (приблизительная продолжительность 7-8 часов). Переезд в Хоа Лы — бывшую древнюю столицу Вьетнама, посещение храмов императоров Динь и Ле- крупнейших буддийских храмов Вьетнама, Осмотр панорамы Хоа Лы с высоты. Обед в местном ресторане Anh Dung – Ninh Binh Прогулка на джонке в Национальный парк Там Кок. Вас ждет прогулка на лодке по реке среди рисовых полей, окруженных скалами и таинственными гротами со сталактитами. Знакомство с особенностями жизни вьетнамской деревни. После экскурсии переезд с гидом в Ханой (авто с кондиционером). Время в пути примерно 2,5- 3 часа. Прибытие в Ханой. Трансфер на ж/д вокзал. Отправление в Лаокай на ночном поезде. Ночь в поезде (4-местное купе с кондиционером). |
| 6 день |
Встреча на вокзале с гидом. Лаокай – городок на границе с Китаем, где по утрам на местном рынке собираются торговцы из различных племен, проживающих в окрестных горах. Переезд в Сапу (около 34 км, с набором высоты около 1200 м) – горный курорт и отправная точка для множества пеших маршрутов, в том числе на высочайшую вершину страны Фансипан. Это бывший французский горный курорт. За один день здесь сменяются все четыре времени года: утром – весна, днем – лето, вечером – осень и ночью – зима. Сапа — это изумительное сочетание альпийского ландшафта, этнических культур и чистейшего горного воздуха. Сам древний город Сапа был обнаружен в девятнадцатом веке французами, которые оценив мягкость климата и красоту природных ландшафтов, выбрали Сапу городом для проведения своего летнего досуга, дополнив городской архитектурный комплекс постройками в колониальном стиле. Местные же жители, не утратив своей национальной самобытности, и по сей день чтут свои традиции и обычаи: посещение рынка в Сапе – один из самых ярких моментов этого путешествия, настолько он колоритен и ярок. Здесь происходит не только торговля и обмен товарами, но и проводятся национальные праздники и фестивали. Прибытие в Сапу, размещение в отеле, завтрак. Посещение Серебряного водопада, деревни этнической группы «Zao» Тафин. Ночь в Сапе. |
| 7 день |
После завтрака пешая экскурсия в деревню Таван этнической группы Zay, знакомство с бытом жизнью и традициями местных жителей. Посещение ротангового моста. Свободное время для посещения рынка. Трансфер на вокзал. Ночь в поезде (4-местное купе с кондиционером). |
| 8 день |
Прибытие в Ханой. Обзорная экскурсия по Ханою (продолжительность 3,5 — 4 часа). Посещение основных достопримечательностей столицы:
После экскурсии индивидуальный трансфер с русскоговорящим гидом в аэропорт. Регистрация на рейс. |
Программу рекомендуем продлить пляжным отдыхом на курорте, посещением других регионов Вьетнама либо соседних стран.
Доктор Сабин Захирович — Страница 2 — EarthByte
Цитирование
Мэтьюз, К.Дж., Мэлони, К.Т., Захирович, С., Уильямс, С.Е., Сетон, М., и Мюллер, Р.Д. (2016). Глобальная эволюция границ плит и кинематика с позднего палеозоя, глобальные и планетарные изменения, 146, 226–250. DOI: 10.1016 / j.gloplacha.2016.10.002
Абстракция
Многие аспекты моделей глубоководной системы Земли, включая мантийную конвекцию, палеоклиматологию, палеобиогеографию и глубинный углеродный цикл Земли, требуют моделей плит с высоким разрешением, которые включают эволюцию мозаики границ плит во времени.Мы представляем первую непрерывную модель глобальной плиты от позднего палеозоя до сегодняшнего дня с эволюционирующими границами плит, основанную на двух ранее опубликованных моделях для позднего палеозоя (410–250 млн лет) и мезозоя-кайнозоя (230–0 млн лет). Мы обеспечиваем непрерывность в течение переходного периода 250–230 млн лет между двумя моделями, обновляем абсолютную систему отсчета мезозойско-кайнозойской модели и добавляем новую палеозойскую реконструкцию для александровского террейна, полученного из Балтики, в настоящее время аккрецируемого в западной части Северной Америки.Эта модель открытого доступа 410–0 млн. Лет обеспечивает основу для глубокого моделирования всей Земли и служит основой для будущих расширений и уточнений.
Эта модель доступна с системой отсчета мантии по умолчанию, гибридной системой отсчета с использованием движущихся точек и палеомагнитной системой отсчета с поправкой на истинное полярное блуждание (подробности см. В документе), а также с палеомагнитной системой отсчета. В период до 83 млн лет Тихий океан смещается, чтобы поддерживать относительные движения с континентами, окружающими Пангею — в основном из-за того, что не существует палеомагнитных систем отсчета, которые охватывают период рождения Тихоокеанской плиты.Палеомагнитная система отсчета основана на данных Torsvik, TH, Van der Voo, R., Preeden, U., Mac Niocaill, C., Steinberger, B., Doubrovine, PV, van Hinsbergen, DJ, Domeier, M., Гайна, К., Тохвер, Э., 2012, Фанерозойские полярные блуждания, палеогеография и динамика: обзоры наук о Земле, т. 114, вып. 3, стр. 325-368, DOI: 10.1016 / j.earscirev.2012.06.007.
… Подробнее…
Кластер случаев паралитического полиомиелита, вызванного передачей полиовируса вакцины Сабина 2 с небольшим отклонением
РЕЗЮМЕ
Четыре случая острого вялого паралича, вызванного слаборазвитыми (сабиноподобными) вакцинами полиовируса серотипа 2, зарегистрированы с июля по август 2010 г. детский дом Бийска (Алтайский край, Россия).Бийский кластер вакцинно-ассоциированного паралитического полиомиелита (ВАПП) имел несколько необычных, если не уникальных, особенностей. (i) До этой вспышки вирусы, подобные Сэбину (в отличие от более заметно эволюционировавших полиовирусов вакцинного происхождения [VDPV]), как сообщалось, вызывали только спорадические случаи VAPP. Следовательно, считалось, что случаи ВАПП не требуют ответных мер по типу вспышки. Однако эпидемиологическая вспышка в Бийске полностью стерла границу между сабиноподобными вирусами и ВРПВ. (ii) Вспышка продемонстрировала очень высокий коэффициент заболеваемости / инфицированности, явно превышающий даже тот, который зарегистрирован для диких полиовирусов.Структуры вирусного генома не давали каких-либо существенных указаний на основную причину (ы) такой патогенности. (iii) У двух пациентов наблюдали замещение клонов кишечного полиовируса другими клонами, подобными Сэбину, в короткие промежутки времени после начала заболевания. Опять же, последовательности соответствующих геномов не давали никаких ключей для объяснения этих событий. (iv) Полиовирусы, изолированные от пациентов и их контактов, продемонстрировали поразительную гетерогенность, а также быструю и неравномерную эволюцию целых геномов и их частей, по-видимому, из-за обширных межличностных контактов в относительно небольшом замкнутом сообществе, множественных узких мест и рекомбинации.В целом, результаты демонстрируют несколько новых аспектов патогенности, эпидемиологии и эволюции вакцинных полиовирусов и подчеркивают несколько серьезных пробелов в понимании этих проблем.
ВАЖНОСТЬ Оральная полиовакцина в значительной степени способствовала почти полному исчезновению полиомиелита, вызванного полиомиелитом. Как правило, он безопасен, но в некоторых случаях может привести к паралитическому заболеванию. Различают два типа таких исходов: вызванные слегка дивергированными (подобными Сэбину) вирусами, с одной стороны, и теми, которые вызваны значительно различающимися ПВВП, с другой.Эта классификация основана на количестве мутаций в области вирусного генома, кодирующей структурный белок вируса. До сих пор были описаны только спорадические случаи полиомиелита, вызванного полиовирусами типа Сабина, и в отличие от вспышек, вызванных ПВВП, они не требовали широкомасштабных эпидемиологических ответных мер. Здесь сообщается о необычной вспышке полиомиелита, вызванной вирусом, подобным вирусу Сэбина, с исключительно высоким коэффициентом заболеваемости / инфицированности. Эта вспышка стерла границу между полиовирусами, подобными Сабину, и ПВРП как по патогенности, так и по типу требуемых ответных мер, а также подчеркнула важные пробелы в понимании патогенности, эпидемиологии и эволюции полиовирусов вакцинного происхождения.
ВВЕДЕНИЕ
В результате реализации Глобальной инициативы по ликвидации полиомиелита, запущенной Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) в 1988 году, заболеваемость паралитическим полиомиелитом во всем мире снизилась примерно на 2 порядка. Успех был во многом обусловлен использованием двух выдающихся вакцин: инактивированной полиовакцины Солка (ИПВ) и живой пероральной полиовакцины Сэбина (ОПВ). Несмотря на очевидные достоинства этих вакцин, у этих вакцин есть недостатки: первые не вызывают устойчивого кишечного иммунитета и, следовательно, не могут предотвратить передачу диких полиовирусов, тогда как последние могут быть связаны, хотя и довольно редко, со случаями паралитического полиомиелита, что особенно важно. Это важно сейчас, когда частота заболеваний, вызываемых дикими полиовирусами, значительно снизилась.
Обычно различают две ситуации, связанные со случаями полиомиелита, ассоциированного с ОПВ. Заболевание может быть вызвано у реципиентов вакцины или их контактов исходными или слегка эволюционировавшими (подобными Сэбину) вакцинными вирусами вскоре после вакцинации (1). Такие случаи называются вакцино-ассоциированным паралитическим полиомиелитом (ВАПП). Другие случаи могут быть вызваны заметно разошедшимися вакцинными вирусами после их скрытой циркуляции или скрытой эволюцией в одном организме до появления. Такие вирусы получили название полиовирусов вакцинного происхождения (ПВРП) (2).В настоящее время официальным критерием для классификации вируса, происходящего из OPV, как VDPV является наличие 10 или более мутаций в области, кодирующей вирусный капсидный белок VP1 для серотипов вакцины 1 и 3, и не менее 6 мутаций в этой области для серотипа 2 (3). .
Способность вызывать заболевание, по-видимому, связана, по крайней мере в большой степени, с внутренней генетической нестабильностью штаммов Сэбина, которые были намеренно выбраны для снижения вирусной пригодности за счет приобретения подавляющих приспособленность, ослабляющих нейровирулентность. мутации (4).После проглатывания вакцинированным вирус претерпевает эволюцию, начиная с зараженного организма, а затем, если позволяют условия, в ходе последующей передачи через цепочки контактов. Эта эволюция происходит в два этапа (5). Первая фаза (через несколько недель после вакцинации) состоит из быстрого устранения основных ослабляющих мутаций путем реверсий или компенсирующих замен и последующего восстановления приспособленности и нейровирулентности, сопоставимых с таковыми у диких полиовирусов; Межтипная рекомбинация между серотипами вакцины часто может иметь место после использования трехвалентной ОПВ.Вторая фаза включает более или менее линейное накопление мутаций (в основном синонимичных), часто сопровождаемых рекомбинацией с неполиовирусами вида энтеровируса С. Эта фаза, в конечном итоге приводящая к образованию ВРПВ, не документирована как связанная с систематическим параллельным повышением приспособленности или вирулентности, хотя нельзя исключать изменения такого рода.
Случаи ВАПП известны как спорадические, каждый из которых считается независимым событием (1, 2, 6), тогда как ПВРП могут вызывать не только спорадические заболевания у иммунокомпетентных (7, 8) или лиц с ослабленным иммунитетом (2, 9), но и также вспышки, иногда довольно крупные (2, 10).Из-за последней склонности ПВРП привлекают особое внимание органов общественного здравоохранения, что требует срочных широкомасштабных ответных мер для сдерживания их передачи.
Несмотря на общепринятое различие между случаями полиомиелита, вызванными ВАПП и ПВВП, граница между ними плохо обозначена. Здесь мы сообщаем о небольшом кластере случаев паралитического полиомиелита, который был спровоцирован слегка диверсифицированным серотипом 2 ОПВ, подобным Сабину (то есть случаями ВАПП), но эпидемиологически очень напоминал вспышки, вызванные ПВПВ.Важно отметить, что этот кластер характеризовался чрезвычайно высоким соотношением болезней / инфекций. Это исследование предоставляет новую и неожиданную информацию об эпидемиологии полиомиелита (в частности, об эпидемиологии ВАПП), но, с другой стороны, оно подчеркивает значительные пробелы в нашем понимании этих тем, а также патогенеза заболевания.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Происхождение образцов. Образцы стульев от пациентов и их контактов были собраны в детском доме города Бийска (Алтайский край, Россия) в соответствии с рекомендациями ВОЗ (11).
Вирусологические исследования. Выделение вируса из стула и серотипирование проводили стандартными методами (12). Внутритипная дифференциация (ITD) проводилась с помощью иммуноферментного анализа (ELISA) с перекрестно абсорбируемой поликлональной антисывороткой (любезно предоставлена HG van der Avoort, Национальный институт общественного здравоохранения и защиты окружающей среды [RIVM], Нидерланды) (12, 13) и обратной транскрипции (RT) -PCR в реальном времени (14). Для секвенирования РНК полиовируса выделяли из инфицированных клеток с помощью мини-набора RNeasy (Qiagen) и подвергали обратной транскрипции с использованием случайных гексамерных праймеров (Syntol) и обратной транскриптазы SuperScript II (Invitrogen).Для секвенирования областей VP3-VP1 и полногеномного секвенирования кДНК двух и восьми перекрывающихся геномных фрагментов, соответственно, амплифицировали с помощью ПЦР. (Последовательности праймеров доступны по запросу.) Продукты очищали с помощью системы очистки ДНК QiaQuick (Qiagen). Секвенирование проводили с использованием генетического анализатора ABI 3130.
Серологический анализ. Антитела, нейтрализующие полиовирус, в сыворотке крови человека определяли методом микронейтрализации (11). Анализы выполнены вирусологической лабораторией Центра гигиены и эпидемиологии Алтайского края, г. Барнаул, Россия.
Методы биоинформатики. Последовательности генома были собраны с использованием программного обеспечения Lasergene (версия 7.0.0; DNAStar). Множественные выравнивания, оценка степени расхождения нуклеотидов и построение филогенетических деревьев проводили с помощью пакета MEGA6 (15). Сходство выведенных нуклеотидных и аминокислотных последовательностей с последовательностями, доступными в базе данных GenBank, оценивали с помощью BLAST (16).
Оценка возраста вирусных изолятов. Оценка очевидной продолжительности эволюции вирусных изолятов после их расхождения с Sabin 2 была основана на следующих отчетных данных: частота синонимичных замен на синонимичный сайт в разных регионах вирусного геном последовательных связанных с Sabin 1 вирусов, выделенных от пациента с иммунодефицитом (17), частота синонимичных замен на синонимичные положения кодона третьего основания в геномах вирусов, связанных с Sabin 3, от другого пациента с иммунодефицитом (18) и частота синонимичных замен на синонимичный сайт в области P1 полиовирусов дикого типа 1, произошедших от общего предка (19).Значения соответствующих параметров были взяты из ссылок 18 и 19 или рассчитаны с помощью программы MEGA6 с использованием данных, представленных в ссылке 17.
Номера доступа нуклеотидных последовательностей. Номера доступа нуклеотидных последовательностей для последовательностей, представленных в GenBank, являются KU598883 — KU598891.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Вспышка. Летом 2010 г. у четырех детей в детском доме в Бийске, городе Алтайского края России, появились симптомы острого вялого паралича (ОВП).От всех из них были выделены вакцино-родственные полиовирусы серотипа 2. У трех пациентов паралич сохранялся более 60 дней. После анализа клинических и вирусологических данных Национальная комиссия по диагностике полиомиелита и ОВП диагностировала у всех четырех этих пациентов вакцино-ассоциированный паралитический полиомиелит (ВАПП).
В детском доме проживало 115 детей до 5 лет, разделенных на изолированные группы по возрасту. Первый пациент, PT1 (годовалый мальчик) проявил признаки паралича 22 июля, за ним последовал PT2 (16-месячная девочка, впервые проявившая признаки болезни 7 августа), PT3 (11-летняя девочка). месячный мальчик, впервые проявивший признаки болезни 7 августа), и PT4 (10-месячный мальчик, впервые проявивший признаки болезни 14 августа).До вспышки вакцинация ОПВ в приюте не проводилась с 2007 года.
У всех четырех жертв полиомиелита в анамнезе были многочисленные заболевания. До появления признаков ОВП PT1 4 раза поступал в изолятор детского дома с инфекциями дыхательных путей и двусторонним отитом. У PT2 в анамнезе было 3 госпитализации в это отделение с респираторными инфекциями и ветряной оспой. Кроме того, после первой госпитализации она лечилась от дисметаболической нефропатии в Бийской детской больнице в течение 6 недель.Еще двое детей были помещены в изолятор приюта с респираторными инфекциями.
Дважды проведенный серологический анализ (таблица 1) подтвердил, что пациенты не были вакцинированы против полиовируса до вспышки. Действительно, у всех отсутствовали антитела против серотипа 1, а у трех из них не было антител против серотипа 3. Наличие антител против серотипа 2 соответствовало инфицированию соответствующим вирусом. Повышение титра антител против этого серотипа во время заболевания продемонстрировано в двух случаях.Следует отметить, что 31 июля РТ2 получил дозу трехвалентного ИПВ, что, однако, не предотвратило появление признаков ОВП через неделю и не привело к появлению антител к полиовирусу серотипов 1 и 3.
ТАБЛИЦА 1Антиполиомиелитные антитела в сыворотке больных ОВП
Ответ на вспышку. В ответ на вспышку в приюте было проведено два раунда вакцинации ИПВ с 26 июля по 4 августа и с 6 по 10 сентября, в которых участвовали 112 и 109 детей соответственно.Образцы фекалий были собраны у 91 человека: 50 здоровых детей (1 из которых, PT4, позже заболел полиомиелитом) и 41 сотрудника детского дома с 9 по 13 августа, и 31 из них дал положительный результат ПЦР на наличие РНК энтеровируса. Полиовирусы типа 2 были выделены из 20 (22%) этих образцов.
После вакцинации (21–23 августа и 4–6 сентября) сыворотки 106 детей были исследованы на наличие нейтрализующих антител. Подавляющее большинство (89 детей [84%]) обладали антителами ко всем трем серотипам полиовируса (следует отметить, что по официальной информации большинство воспитанников детских домов были вакцинированы ИПВ еще до вспышки), а у остальных детей не было. антитела к одному (1 ребенок с отрицательным серотипом 2), двум (13 детей с отрицательным серотипом 1 и 3) или трем (3 детям) серотипам полиовируса.
Характеристика вирусных геномов. Было проведено полное секвенирование геномов полиовирусов, выделенных на ранней стадии (от 0 до 6 дней) после появления симптомов; таким же образом был проанализирован вирус, выделенный от одного пациента (PT4) за 2 дня до появления первых признаков заболевания (геном PT4-0 ) (таблица 2). В дополнение к своим уникальным мутациям, все эти геномы обладали 15 нуклеотидными (нуклеотидными) отличиями от полиовируса Sabin 2: одна замена в 5′-нетранслируемой области (5′-UTR), 5 мутаций, приводящих к замене аминокислот, и 9 синонимичных замены в кодирующей белок области.Примечательно, что все вирусы обладали двумя известными деаттенуирующими мутациями: A 481 → G в 5′-UTR и U 2909 → C в области, кодирующей VP1 (41). Ожидается, что первое повысит эффективность трансляции (42, 43), тогда как второе приведет к замене аминокислоты VP1 I 143 → T, ослабляющий эффект которой гипотетически может заключаться в стабилизации вирусной частицы за счет изменения гидрофобный аминокислотный остаток до гидрофильного в области 5-кратной оси капсида (44).Обе мутации были очень распространены среди вирусов, выделяемых вакцинированными ОПВ и их контактами (таблица 2). Одна дополнительная общая мутация, G 1462 → A, привела к замене аминокислоты A 170 → T в другом капсидном белке, VP2, особенно в антигенном сайте 2 (45). Актуальность других распространенных мутаций неясна.
ТАБЛИЦА 2Мутации в полностью секвенированных геномах бийских изолятов
Важно отметить, что все эти ранние вирусные изоляты (геномы PT1 , PT2 , PT3 , PT4-0 и PT4 ) содержали только 3 мутации в последовательности, кодирующей VP1, и поэтому их следует классифицировать в соответствии с принятым в настоящее время определением (3) как сабиноподобные, а не как VDPV.
Распределение мутаций (в дополнение к 15 обычно общим) в этих ранних изолятах можно резюмировать следующим образом. Геном PT1 не имел дополнительных мутаций. Геном PT2 показал близкое сходство с PT1 , имея только 3 дополнительных нуклеотидных замены, что указывает на их близкое родство. Изоляты от двух других пациентов были менее связаны с вирусом PT1 , отличаясь от него в 11 положениях. Фенотипические эффекты, если таковые имеются, этих мутаций неизвестны, но можно отметить, что замены U 156 → C, U 398 → C, G 5949 → A и G 7405 → A являются ожидается, что стабилизирует вторичную структуру доменов II и IV 5 ‘UTR (46), РНК конкурентного ингибитора РНКазы L (ciRNA) , цис -действующий элемент (47) и 3′ UTR (48), соответственно ( Инжир.1).
Рис. 1Нуклеотидные замены в филогенетически консервативных структурных элементах геномов изолятов полиовируса по сравнению со штаммом Sabin 2. Положения измененных нуклеотидов обозначены черными точками и указаны соответствующие мутации; также показаны нуклеотиды, участвующие в образовавшемся спаривании оснований (если они образованы). (A) Домен II 5 ‘UTR. (B) Домены IV и V 5 ‘UTR. (C) Домен Y 3 ‘UTR. Приведены структуры, предложенные ранее (46, 48).(D) Возможное третичное («поцелуйное») взаимодействие между стержневыми петлями 1 и 4 элемента конкурентного ингибитора РНКазы L вирусной РНК (циРНК) (47).
Были также секвенированы геномы вирусов, выделяемых РТ1 (два изолята) и РТ3 (один изолят) во время последующего развития инфекции. Вирус, выделяемый PT1 через месяц после появления симптомов (геном PT1-1 ), демонстрировал поразительно большое отклонение от первого: в нем отсутствовали 10 PT1 -специфических мутаций (в том числе 2 в области, кодирующей VP1). но содержал 9 новых нуклеотидных замен (включая одну в кодирующей области VP1) (таблица 2).Столь же заметное различие отличало следующий изолят от того же пациента ( PT1-2 ), полученный еще на месяц позже, чем PT1-1 : 3 мутации были потеряны и 15 мутации были приобретены (таблица 2). Такое существенное различие предполагает, что вирусы с геномами PT1 , PT1-1 и PT1-2 не входили в линию последовательных потомков, а скорее были сестринскими штаммами, имеющими общего предшественника (см. Ниже). Можно добавить, что мутация, общая для штаммов PT1-1 и PT1-2 , G 3343 → A, привела к замене аминокислоты в позиции 288 капсидного белка VP3, которая, как известно, расположена в антигенном сайте. 3 (45).
Аналогичным образом, геном вируса, выделяемого PT3 через месяц после начала заболевания ( PT3-1 ), обнаруживал значительные отличия от генома исходного изолята. Геномы PT3 и PT3-1 отличались друг от друга по 23 положениям. Наборы мутаций, отличающие эти две РНК от PT1 , были уникальными и не перекрывались (таблица 2). Мутация в VP2 (N 172 → D) и две мутации в VP3 (H 77 → Q и T 80 → A), нацеленные на антигенные сайты 2 и 3b, соответственно (45), были среди различий между последовательные изоляты от этого пациента.
Кроме того, были секвенированы полные геномы вирусов, выделенных 12-13 августа от двух здоровых детей-сирот. Геномы C-1 и C-2 были общими с PT1 15 и 6 нуклеотидными заменами, соответственно, и, кроме того, несли многочисленные неперекрывающиеся мутации (Таблица 2). Среди мутаций C-1 была делеция 3 нуклеотидов в положениях с 2497 по 2499 в кодирующей области VP1, что привело к потере аминокислоты (I 6 ).
Наконец, часть генома полиовируса, охватывающая области, кодирующие VP3 и VP1, и 5′-соседняя часть гена 2A (нуклеотиды 3385–3460) еще 17 вирусов, выделенных между 8 и 13 августа из здоровых контакты были секвенированы (таблица 3). Это было сделано для того, чтобы выяснить, в какой степени изоляты от контактов связаны с изолятами от жертв полиомиелита. Все частично секвенированные контактные изоляты содержали полный набор мутаций, обнаруженных в этой области PT1 , что позволяет предположить, что они произошли от последнего или имели общего предшественника.Шесть изолятов не содержали других замен, а остальные имели от 1 до 4 дополнительных мутаций. Почти все эти мутации были уникальными, но один геном обладал заменой, присутствующей также в C-1 , тогда как другая РНК имела две мутации с PT3 , PT4-0 и PT4 (Таблица 3). Следует отметить, что дополнительные одиночные мутации в кодирующей области VP1 были обнаружены в 4 геномах, и две мутации присутствовали там в одной РНК. Даже последний исключительный геном ( C-13 ), обладающий максимально дивергированной областью, кодирующей VP1 (5 замен), все же следует классифицировать как подобный Сэбину.
ТАБЛИЦА 3Мутации в частично секвенированных производных полиовируса Сабина 2, выделенных из здоровых контактов во время бийской вспышки a
Возможные взаимосвязи между изолятами. Набор геномов, выделенных в приюте, показал довольно необычную комбинацию Особенности. Все они были подобны Сабину, что подразумевает, что они были близкими потомками Сабина 2. Судя по наличию большого количества общих мутаций, все они имели общего предшественника (геном CP ).С другой стороны, этот набор был весьма неоднородным и содержал коллекцию экземпляров, отличающихся друг от друга многочисленными мутациями. Модель их взаимоотношений, совместимая с паттерном скрытой мутации, показана на рис. 2. Наиболее важные особенности этой модели заключаются в следующем.
FIG 2Гипотетический путь эволюции полиовирусов, выделенных в Бийске в 2010 году. Названия геномов изолятов выделены серыми прямоугольниками. Нуклеотидные изменения в их геномах показаны в рамках, причем стрелки, направленные от и к этим рамкам, указывают на приобретение и потерю соответствующих мутаций, соответственно.(Точное время этих изменений неизвестно.) Мутации, приводящие к заменам аминокислот, подчеркнуты, а те, которые, по-видимому, независимо друг от друга возникли в разных штаммах, выделены жирным шрифтом и курсивом. Замещение C 4653 U (отмечено *) присутствовало в части молекул PT1 . Пунктирные линии, соединяющие изолированный вирус PT3 с вирусом PT4-0 / PT4 , отражают неопределенность их реальной взаимосвязи.Временная шкала слева от рисунка показывает количество дней после выделения первого штамма (геном PT1 ).
Мы предполагаем, что общий предшественник (геном CP ) всех исследованных вирусов, содержащий (среди других распространенных мутаций) обе основные деаттенуирующие замены, дал начало по крайней мере двум нисходящим линиям. Один из них привел к генерации с помощью неизвестного количества промежуточных продуктов генома PT1 , который считается общим предшественником исходных изолятов от трех других пациентов.Однако путь к этим изолятам был непростым. Короткая ветвь привела к геному PT2 , предполагая, что последний получил вирус от PT1 либо напрямую, либо через небольшое количество промежуточных носителей. Это мнение соответствовало тому факту, что оба этих ребенка, хотя и посещали разные возрастные группы, провели некоторое время (с 20 по 31 мая и с 17 по 21 июня) вместе в изоляторе до начала заболевания PT1. С другой стороны, ветви, ведущие к геномам PT3 , а также PT4-0 / PT4 , оказались более протяженными.Существующие данные не позволяют определить их точную топологию, которая оказалась совместимой с двумя различными сценариями, оба из которых предполагают существование неизвестного количества промежуточных продуктов: вирусы PT4-0 / PT4 могут быть потомками PT3. (или наоборот), или изоляты от двух пациентов были независимыми потомками общего промежуточного звена (рис. 2).
Как отмечалось выше, вирус, выделенный из PT1 через месяц после начала заболевания, геном PT1-1 , оказался не прямым потомком исходного изолята, генома PT1 , а скорее был представителем отдельная линия произошла от общего предшественника (геном CP ).Изолят, полученный от того же пациента через дополнительный месяц, геном PT1-2 , вероятно, принадлежал к той же ветви, что и вирус PT1-1 , но также не был его прямым потомком. Точно так же геном ( PT3-1 ) вируса, выделенного от пациента PT3 через месяц после первого изолята ( PT3 ), по-видимому, не произошел от последнего, а скорее был представителем другой ветви, производной от PT1 . , который также содержал PT2 и геном ( C-1 ) здорового контакта.
Вышеупомянутая модель также поддерживалась филогенетическими отношениями между штаммами, рассчитанными методом объединения соседей (NJ), реализованным в пакете MEGA6, хотя следует признать, что некоторые ветви дерева недостаточно статистически поддерживаются (не показано) .
Скорость накопления мутаций. Чтобы дополнительно охарактеризовать эволюционный временной ход изолятов, мы попытались оценить их кажущийся «возраст», сравнив темпы накопления мутаций в их геномах с данными, описанными в литературе (17-19) .Само собой разумеется, что молекулярные часы не работают достаточно ритмично в относительно короткие промежутки времени (особенно, если задействован отрицательный / положительный отбор), и поэтому к результатам таких расчетов следует относиться довольно осторожно. Тем не менее, данные, представленные в таблице 4, подтвердили некоторые выводы, описанные в предыдущем разделе, а также предположили наличие некоторых дополнительных событий.
ТАБЛИЦА 4Расчетный возраст полностью секвенированных штаммов и их гипотетического общего предшественника
Результаты показали, что постулируемый общий предшественник всех изолятов действительно был очень близким потомком Sabin 2, едва достигнув возраста одного месяца.Нельзя исключить, что это был рекомбинант, поскольку кодирующая капсид область его РНК была рассчитана как «моложе», чем остальная часть генома. (Следует принять во внимание, что две деаттенуирующие мутации, существующие в геноме, при расчетах игнорировались.) В любом случае эта асимметрия могла в некоторой степени способствовать аналогичной несовпадению возрастов разных частей генома в большинстве случаев. Потомки CP.
Как и ожидалось, некоторые расхождения между расчетным возрастом и реальным сроком выделения вируса также были очевидны.Таким образом, кажущийся возраст вируса PT3-1 был равен возрасту вируса PT3 , несмотря на месячный интервал между датами их выделения, тогда как кодирующая капсид область генома PT1-1 казалась быть даже «моложе», чем эта область вируса PT1 , выделенного месяцем ранее. Хотя такие расхождения вполне могут быть связаны с вышеупомянутой неточностью молекулярных часов, они также могут быть объяснены участием рекомбинации, что особенно вероятно в происхождении генома PT1-1 .
ОБСУЖДЕНИЕ
Генетическая структура изолятов. Геномы вирусов, выделенных от пациентов сразу после начала заболевания, демонстрировали типичную картину, характерную для слабо эволюционировавших (сабиноподобных) вакцинных вирусов, выделяемых вакцинированными или их более или менее развитыми вакцинами. менее тесные контакты. Отличительной особенностью этого паттерна является потеря аттенуирующих мутаций, прежде всего в 5 ‘UTR (изменение нуклеотида A 481 → G) и капсидном белке VP1 (замена аминокислоты I 143 → T) (41, 49) .Кроме того, эти вирусы приобрели аминокислотную мутацию A 170 → T в VP2, которая, как известно, расположена в антигенном сайте. Некоторые из этих геномов также содержали дополнительные индивидуальные мутации в антигенных сайтах (таблица 5), а также замены, стабилизирующие структуру 5′-UTR (46) и 3′-UTR (48), а также цис--действующий элемент в кодирующая область, как сообщается, проявляет активность против РНКазы L (47) (рис. 1). Хотя нельзя исключать некоторые эффекты улучшения физической формы, по крайней мере, некоторых из этих мутаций, мы не знаем сообщений о том, что какие-либо из них (кроме двух, упомянутых в начале этого параграфа) могли бы заметно повысить патогенность или трансмиссивность вируса.Было бы весьма интересно, если бы дальнейшие исследования показали, что некоторые из этих мутаций, тем не менее, связаны с высокой патогенностью.
ТАБЛИЦА 5Возможная биологическая значимость некоторых мутаций, обнаруженных в бийских изолятах
Возможно, следует указать, что все исследованные вирусы были получены из стула и могут не отражать то, что было в центральной нервной системе (ЦНС). Однако одновременное независимое появление необычно патогенной мутации в ЦНС у 4 детей в тесном сообществе представляется маловероятным.
Неоднородность вирусных изолятов и особенности пути передачи. Секвенирование генома вирусов, выделенных от пациентов и их контактов, позволило нам предположить вероятную цепочку передачи вируса (рис. 2). Эта цепочка выявляет своеобразный паттерн, который включает в себя несколько довольно необычных аспектов. Учитывая недавнее общее происхождение, очень небольшую популяцию хозяев (~ 100 человек), их проживание / работу в одном приюте и короткий временной интервал изоляции, популяция циркулирующих там полиовирусов демонстрировала поразительную генетическую гетерогенность, как показали исследования. полное секвенирование генома (таблица 2).Действительно, было по крайней мере две независимо развивающихся разветвленных линии, причем наиболее разветвленные изоляты отличались друг от друга по 44 нуклеотида. Частичное секвенирование области, кодирующей капсид (таблица 3), предоставило дополнительные доказательства необычной гетерогенности местной вирусной популяции.
Такая картина, вероятно, была связана с вовлечением многочисленных узких мест во время передачи вируса в тесном сообществе, не имеющем достаточного кишечного иммунитета к вирусу, что привело к случайному захвату небольших популяций меньшинств из изначально гетерогенных (квазивидов) вирусных сообществ.Интересно, что было несколько несоответствий между временем выделения вирусов и расчетным «возрастом» (временными интервалами после их отклонения от родительского Sabin 2) их геномов или их частей (Таблица 4). Частично такие несоответствия могут быть связаны с неточностью молекулярных часов в короткие периоды времени. Однако также могут быть задействованы множественные события рекомбинации между вирусами, принадлежащими к разным линиям / ветвям. Такая возможность подтверждается приобретением идентичных мутаций (не имеющих известных адаптивных свойств) на разных этапах эволюции вирусов, принадлежащих к разным линиям (таблица 2).Какие из этих событий рекомбинации (если таковые имеются) привели к увеличению вирусной пригодности, остается неизвестным. Однако их вклад в диверсификацию вирусных популяций, создав богатую почву для дальнейшей эволюции, кажется весьма значительным.
Другой необычной особенностью исследуемой вспышки было замещение кишечной популяции другой независимой популяцией, причем обе они получены из ОПВ. Действительно, геном PT1-1 принадлежал к отдельной линии по сравнению с геномом PT1 , в то время как PT1-2 , по-видимому, не был прямым потомком PT1-1 , о чем свидетельствует отсутствие в нем 3 и получение замен 15 нт (рис.2). Эти факты еще раз продемонстрировали коциркуляцию различных вирусных популяций в закрытом сообществе и позволили предположить, что эти популяции демонстрировали разные уровни приспособленности. Однако единственной мутацией, отличающей PT1-1 от вируса PT1 , имеющего известное фенотипическое значение, была замена аминокислоты D 288 → N в антигенном сайте 3b VP1. Однако эта мутация вряд ли могла быть единственной причиной очевидного преимущества PT1-1 . Среди мутаций, отличающих PT1-2 от PT1-1 , была также одна мутация с известным эффектом, а именно, влияющая на вторичную структуру цис -активного элемента , способного подавлять активность защитного механизма хозяина. фермент РНКаза L.Неясно, в какой степени эта мутация может привести к значительному увеличению приспособленности. Аналогичная картина была продемонстрирована и другой парой изолятов, а именно вирусами, выделяемыми РТ3 с месячным интервалом. Геномы PT3 и PT3-1 явно принадлежали к разным ветвям линии, и среди многочисленных генетических различий были некоторые с известными или вероятными фенотипическими эффектами. Таким образом, вирус PT3-1 имел замену одной и двух аминокислот в антигенных сайтах 2 и 3b соответственно (таблица 5), что потенциально могло способствовать его размножению в кишечнике PT3 с уже частично повышенным иммунитетом слизистой оболочки.С другой стороны, вирус PT3-1 был лишен мутаций, присутствующих в вирусе PT3 , которые могли стабилизировать вторичные структуры L-супрессирующего РНКазу L-супрессирующего элемента цис и домена в 3 ‘UTR.
Таким образом, остается загадкой, почему может происходить колонизация кишечника вакцинированных другими производными OPV того же серотипа и почему новички могут превзойти прямых потомков первоначально полученных вирусов. Также неизвестно, были ли такие изменения результатом повторного заражения или своего рода «борьбы за выживание наиболее приспособленных» среди членов изначально гетерогенных исходных популяций.
Паралитическое заболевание, вызванное VAPP- и VDPV. Как указано во введении, два описанных выше состояния, хотя оба они вызваны вирусами, происходящими от OPV, считаются отличающимися друг от друга по крайней мере в двух отношениях: уровень расхождения их возбудителей из штаммов Sabin, а также их эпидемиологические характеристики. Описанный здесь кластер заболеваний был вызван близкородственными вариантами вируса OPV-2 (три мутации в области генома, кодирующей белок капсида VP1).Следовательно, этот кластер следует рассматривать как настоящую вспышку ВАПП. Это кажется довольно необычной ситуацией, поскольку, насколько нам известно, ранее были описаны только спорадические независимые случаи ВАПП (1, 6). Показанная здесь способность вирусов, подобных Сэбину, вызывать вспышки полиомиелита, стирает границу между паралитическим заболеванием, вызванным ВАПП и ПВПВ. Фактически, первые можно рассматривать как подгруппу вторых, тем более что для сдерживания вспышек ВАПП могут потребоваться эпидемиологические меры, идентичные тем, которые направлены на прекращение вспышек ПВРП.
Кажется очевидным, что одним из условий, необходимых для возникновения вспышки, вызванной производными ОПВ, является наличие достаточно большой когорты людей, неиммунных к полиовирусу. Случаи ВАПП обычно подразделяются на 3 категории: случаи у реципиентов ОПВ и случаи, когда известно, что вакцинированные контактировали, а также так называемые «внебольничные» случаи, когда человек, выделяющий первичный вирус, неизвестен (6 ). Описанный здесь кластер относится к последней категории.Было бы важно знать, насколько велико соответствующее сообщество людей, восприимчивых к полиомиелиту, и насколько широко распространен вирус, производный от ОПВ. У нас есть лишь частичные ответы на эти вопросы.
Нижний предел размера сообщества, восприимчивого к полиомиелиту, составляет менее 100 жителей детского дома (поскольку значительная часть этого сообщества была иммунизирована ИПВ до вспышки). Нет информации о том, действительно ли уязвимое сообщество было значительно больше.Мы не знаем первичного вакцинированного, который выделил предшественника вирусов, циркулирующих в приюте. Также неизвестен путь передачи от этого первоначального возбудителя к жертвам болезни, хотя участие персонала приюта или контактов в больнице кажется вполне вероятным.
Хотя наличие восприимчивой когорты является необходимым условием возникновения вспышки, этого недостаточно, как обсуждается ниже.
Соотношение заболевание / инфекция.Известно, что менее 1% иммунокомпетентных, но неиммунных людей, инфицированных дикими полиовирусами, заболевают паралитическим заболеванием, тогда как для серотипа 2 это значение может составлять всего 0,05% (50). Заболеваемость ВАПП на несколько порядков ниже и может быть меньше 1 случая на миллион доз ОПВ (1) в разных странах. В описанном здесь примере это соотношение было беспрецедентно высоким. Примечательно, что, как упоминалось выше, сообщалось, что большинство детей из детских домов ранее были вакцинированы ИПВ.Тот факт, что, судя по присутствию вируса или его РНК, по крайней мере 23 из них (из 53 исследованных) были инфицированы вирусом, подобным Сабину, соответствовал известной неспособности ИПВ сдерживать циркуляцию полиовируса, при этом эффективно предотвращая болезнь (51). Однако у четырех невакцинированных детей из этого в основном вакцинированного небольшого сообщества развился ВАПП, демонстрируя уникально высокое соотношение заболеваемость / инфицированность, значительно превышающее таковое для дикого полиовируса. По общему признанию, учитывая, что некоторое неизвестное количество людей за пределами приюта также могло быть инфицировано бессимптомно, это соотношение могло быть несколько завышено.Однако, похоже, он остается исключительно высоким.
Хотя наше понимание природы вирусных геномных особенностей, ответственных за нейровирулентность, очевидно, неполное, нет четких доказательств или даже обоснованных предположений о том, что вирусы, циркулирующие в приюте, были особенными в этом отношении. Вирус действительно попал в детский дом откуда-то извне — например, от персонала больницы, в которую были госпитализированы некоторые дети до вспышки. Тем не менее, не было зарегистрировано ни одного случая полиомиелита за пределами приюта, что позволяет предположить, что ситуация в приюте в некоторых неизвестных аспектах была весьма особенной.
Можно рассмотреть несколько потенциально способствующих факторов. Несомненно, важным обстоятельством было то, что пострадавшие от полиомиелита (и, возможно, некоторые другие дети из детских домов) не были вакцинированы до вспышки. Однако, когда любая вакцинация против полиомиелита была отменена на 3 года (с 1963 по 1966 год) в районе Белоруссии с населением около 160 000 человек, это привело к широкому распространению связанных с вакцинами вирусов трех серотипов. Тем не менее, о паралитических заболеваниях не сообщалось (27).Точно так же введение цПВВП-1 в невакцинированное сообщество в Соединенных Штатах привело к единственному случаю полиомиелита (у ребенка с ослабленным иммунитетом) (9).
Также можно упомянуть другие возможные факторы, повышающие риск, такие как тесные межличностные контакты и плохое здоровье многих детей. Эти факторы, однако, не являются исключительными для этого детского дома. Анализ заболеваемости ВАПП в Румынии показал, что внутримышечные инъекции вскоре после получения вакцины или контакта с вакцинированными могут быть фактором риска, повышающим вероятность заболевания (52).Нет информации о том, применялась ли эта процедура в Бийском детском доме во время вспышки ВАПП. Хотя нельзя полностью исключить вклад этого фактора, его решающая роль маловероятна, потому что сообщаемое увеличение вероятности спровоцировать болезнь в Румынии было не так велико, и даже такое увеличение не является обычным явлением, не задокументированным. в США (53). Также нельзя исключить возможность того, что реакция пациентов на заражение вирусом, подобным вирусу Сабина, была преувеличена из-за коинфекции другим вирусом / микробом.В этой связи можно отметить, что коинфекция полиовирусом, производным от ОПВ, увеличивала тяжесть заболевания, вызванного энтеровирусом (54). Однако следует признать, что мы не можем дать никаких доказательных объяснений необычного соотношения болезней и инфекций во время вспышки в Бийске.
Заключительные замечания. В этой статье описывается небольшая вспышка паралитического полиомиелита, вызванная слегка разветвленными производными ОПВ (в соответствии с действующей номенклатурой, скорее, по типу Сабина, чем ВРПВ).Это укрепляет мнение о том, что нет четкой границы между заболеваниями, вызванными ВАПП и VDPV. Это не просто семантическая проблема, поскольку отсутствие существенных различий означает, что обе ситуации могут потребовать одинаковых эпидемиологических ответных мер. Необычно высокое, если не уникальное соотношение заболеваемости и инфицированности, наблюдаемое в этом приюте, остается необъяснимым и подчеркивает наличие важных пробелов в нашем понимании патогенеза и эпидемиологии полиомиелита. Вспышка представляет собой дополнительное свидетельство того, что детские дома и аналогичные учреждения могут представлять собой зоны повышенного риска (см. Также ссылки 7 и 33), требующие особого внимания со стороны органов здравоохранения.Наконец, тот факт, что вспышка ВАПП была вызвана производным вируса Сабина 2, имеет прямое отношение к запланированному удалению этого вируса из ОПВ и замене трехвалентной ОПВ на двухвалентную (типы 1 и 3) (55, 56). ). С одной стороны, вспышка в Бийске может рассматриваться как дополнительный аргумент в пользу таких планов. С другой стороны, эта вспышка демонстрирует значительную опасность, связанную с существованием даже относительно небольших когорт, неиммунных против этого серотипа полиовируса.На наш взгляд, оптимальным решением этой неопределенности было бы не просто прекращение использования вируса Сэбина 2, а, скорее, замена его альтернативой, более безопасным вирусом живой вакцины того же серотипа или неживой вакциной, способной укреплять кишечный иммунитет, делая его реципиенты нечувствительны к инфекции и не могут быть скрытыми переносчиками в цепях передачи.
Правильное написание слова sabin [Инфографика]
Распространенные орфографические ошибки в SABIN
Ниже приведен список из 142 орфографических ошибок слова «сабин».
Слова, похожие на написание SABIN
Форма множественного числа от САБИН — САБИН
37 слов из букв САБИН
3 буквы
- ais,
- грех,
- бай,
- NSA,
- Айн,
- ins,
- перо,
- isn,
- наб,
- бнс,
- sba,
- бис,
- ани,
- сиб,
- бан,
- ANS,
- мусорное ведро.
4 буквы
- бункеры,
- перья,
- уклон,
- анис,
- баны,
- Сиань,
- набс,
- Баси,
- Сиба,
- asin,
- сниб,
- Анси,
- bnai.
5 букв
Бухари я сауке Буратай да сауран маньян хафсошин соджин Наджерия
Асалин хотон, правительство Нигерии
Баянан хото,Джанар И. Аттахиру ши не сабон баббан хафсан соц.
Шугабан Наджерия Мухаммаду Бухари я санар да саукэ манян хафсошин царь Хасар таре да йи масу ритайя.
Санарвар да май бай ва шугабан шавара кан харкокин ватса лабарай Феми Адешина йа фитар та се шугабан я майе гурбинсу да саббин маньян хафсошин соджин.
Хафсошин соджин сун унши баббан хафсан царь Хасар Джанар Абайоми Олонисакин; да баббан хафсан соджин Шаса Джанар Тукур Буратай; да баббан хафсан соджин соджан рува вице-адмирал Ибок Экве Ибас; da babban hafsan sojin sama маршал авиации Садик Абубакар.
Шугаба Бухари я нада су кан мукаман не а шекарар 2015 баян я йи насара а забэ карон фарко.
Шугабан я наɗа саббин манян хафсошин соджин камар хака:
Джанар Лео Ирабор — ши не ака наɗа баббан хафсан царо
Джанар И. Аттахиру — баббан хафсан соджан Шаса.
Контр-адмирал А.З. Гамбо — баббан хафсан соян рува
Вице-маршал авиации И.О. Амао — баббан хафсан соджан сама.
Санарвар, Шугаба Бухари йа годе ва хафсошин соджин масу барин гадо ваɗанда йа се «сун саму гагарумар насара а шодаринсу на самар да заман лафия а шаса таре да йи масу фатан алхери.»
Shin ba a makara ba?
Asalin hoton, Getty Images
Bayanan hoto,Galibin ‘yan Najeriya sun dade suna kokawa kan gazawar Manyan hafsoshin sojin da aka kora daga aiki’ Яки
да маджалисун тарайяр ƙасар сун йи та кирайе-кирайен айватар да сауйе-сауйе чикин харкокин царон Наджерия.
Кума кирайе-кирайен сунь фи карката га буƙатар салламар маньяна ааубодара
Cikin sanarwar da fadar shugaban Najeriya ta fitar ba ta fadi dalilin sauke hafsoshin sojin ba, amma ga an Najeriya ba ya rasa nasaba da matsin lamba da kuma gazawarsu, wani abu da za an makya cewa.
Matsalar ƴan fashi masu garkuwa da mutane da satar shanu sai ara girma взять янкин арева масо яммачи байя га кума гирман баразанар Боко Харам янкин арева масо габашин Наджерия.
Маганс матсалар царо на цикин манян алкавулан да Шугаба Бухари я йи ва ан наджерия а локасин яƙин неман заɓенса на 2015 год.
A saƙonsa na kirsimetin 2020, shugaba Buhari ya ce matsalolin tsaron da asar ke fama da su, sun fi arfin ‘yan shawarwarin da ake bazawa a gari a matsayin hanyoyin shawo kansu.
Сай дай дук да хукумоми на сева ан саму насарарори а яти да Боко харам янкин арева масо габас да кума каккабе ан биндига масу фашин даджи да сатар мутане домин кудин фанса, хар яндзу-ана каи харе.
Karin labaran da za ku so ku karanta:
Музыкальный гид | Поп-музыканты | |
В циркулирующей библиотеке — база данных викторианской художественной литературы, 1837-1901 годы | Авторы Викторианской эпохи | |
Авторес.uy: la base de datos de autores de Uruguay | Уругвайские авторы | |
Bai du bai ke: совместная веб-энциклопедия на китайском языке | ||
Baidu | Китайские имена | |
BBC Найди художника | Художники | |
Большая биографическая энциклопедия | Русские имена | Доступ к отдельным записям не всегда надежен |
Британский индекс книжной торговли | Британские авторы 18 и 19 веков, иллюстраторы, издатели, печатники, книготорговцы, переплеты | |
CALIS | китайских имен из редких изданий | |
Индекс фотографов RCS Библиотеки Кембриджского университета | Фотографы, фотоателье | |
Список членов Ассоциации китайских писателей | Китайские писатели | |
Книги CiNii | Японские авторы | |
CNKI | Китайские имена из журналов и диссертаций | Требуется Princeton netID |
Критический словарь английской литературы и британских и американских авторов, живущих и умерших, с самых ранних отчетов до середины XIX века… | художников и иллюстраторов XIX века | Полный текст доступен онлайн через Sabin Americana. Требуется Princeton netID |
Currículo lattes | Бразильские ученые, ученые, исследователи, академики | |
Словарь искусствоведов | Историки искусства | |
Дусю | Китайские имена | Требуется Princeton netID |
Ранняя английская онлайн-книга | ||
Enciclopédia Itaú Cultural | Бразильские художники | |
Энциклопедия иудаики | Имена на иврите | Требуется Princeton netID |
Энциклопедия евреев в исламском мире | Имена на иврите | Требуется Princeton netID |
Каталог английских коротких заголовков | Авторы, иллюстраторы, издатели, полиграфисты, книготорговцы, переплетчики старопечатных книг на английском языке | |
Список имен художников Союза Гетти | Художники | |
Гонконг CAN | Китайские имена | |
IMDb | Кино- и телеиндустрия | |
Международная ассоциация музыкальных информационных центров | Музыкантов | |
Бесценный | Художники | |
JapanKnowledge Lib | Японские авторы, японские классические имена | Требуется Princeton netID |
Kongfuzi | китайских имен из устаревших публикаций | |
Красная книга российской эстрады | Люди советского шоу-бизнеса | |
Картирование практики и профессии скульптора в Великобритании и Ирландии 1851-1951 | Британские и ирландские скульпторы | Люди просматривают |
MGG Онлайн | Музыкантов | |
Musica brasilis | Бразильских композиторов | |
Музыкальная энциклопедия | Российские музыканты | |
Национальный архив Ирландии, 1858-1922 гг. | ||
Национальные галереи Шотландии | Художники | |
Национальная портретная галерея | Художники | |
Oxford Art Online | Художники | Требуется Princeton netID |
Oxford Music Online (содержит New Grove) | Музыкантов | Требуется Princeton netID |
Фотографы Великобритании и Ирландии 1840-1940 | Британские и ирландские фотографы | |
Ricorso | Ирландские авторы | |
Королевский колледж врачей | Врачи | |
Королевский колледж хирургов | Хирурги | |
Индекс шотландской книжной торговли | Шотландские авторы 18 и 19 веков, иллюстраторы, издатели, полиграфисты, книготорговцы, переплеты | |
Союзные каталоги ранних японских книг | Японские классические авторы | |
Универсальный каталог коротких заголовков | ||
ВИАФ | Органы государственной власти | |
Органы Web NDL | Японские авторы | |
Валлийская биография в Интернете (Национальная библиотека Уэльса) | Власти Уэльса | |
WhoPlus (Япония) | Трудно найти японские имена | Требуется Princeton netID |
Викиданные | Органы государственной власти | Многоязычный |
Есасия.com | Японские режиссеры, актеры и т. Д. |
Agur t «erdi, Sabin — Diario de Noticias de Alava
Гонтзал Мендибил
сабин, гаурко хонетан бихотц барруко сантиментуак адиерази гура деустазат, геур бетико euskerea erabiliz. «Abenduaren 29an, heu agurtzera jendetza etorri zoan egunean, hiru argi izpi somatu ñoazan bizirik hagoala konturatzeko. Eguerdi aldera, heugaz pentsetan ñengoan zea txorzenrekantuan etazio en jarduno.Bigarrenik, heuri agurra emokeran, asko eta asko egon gitzoazan negar anpulluei ezin eutsirik, eta Malkoak euri balitzozak irakurri neunstan heure hileta elizkizunean. Eleizatik urten ahala eurie ari zoan. Bigarren señaletzat hartu ñoan. Inguruan egoan bion lagun urko batek, zera esan jeustan, beitiok hi, Sabinek entzun doa ! »
Arkaitz Estiballez heure omenezko bertsotan hasi zoan eta heu ibilitako Zeaniko abesbatza ññåña ñò. gaiñeko zeruen.Hirugarrenez sentitu ñoan inoiz baino biziago hengoala. Hantxe ikusi индуистский irribartsu, malkoak botau ez daiguzan esan gurean, geuri бегире. Laugarren señalaren baten aiduru segiduko joat, heuk ikusi ze moduten bidali gura doken, esango doat hartzen badoat.
Икуси хиндун Сабин, эра аскотако эта эриткси гузтиэтако йендя билду зоан хеу агурцера. Benetan be, gitxik lortu jabek eta lortuko jabek hik lortu izan dokena. Itxi doken lorra-tza handie eta sakona dok Sabin, эта аренда benetako ametsa, aspaldion guztion arnasean darabiljogukeena lortzen jogukenean, heugaz akordauko gozak.
Heuk esan eustan bizitzak bere neurriek jaukozakeela eta gure nahierak neurtu beexr joguzekeela, mugatuegiak gozakeelako hemen, baina rent nahiak mugatuak baie handiek zoazanti, lasargoin eta azarkenan
Gogoratzen nok, zelan bialdu eustan mezu bat oraintsu, Agirre lehendakariaren Zin egite antzezpena egin giñoanean, Zorionduz eta, benetan be ederra eta hunkigarrie zoala esanez. Сабин, паркетик baie heu be erromantiko bat hintzan eh.Griña eta ilusiñoa erakusten Hinduan nahinon.
Heure arraba kutuneri, andre eta seme alabei esaten ñabikiek bajaukeela horko goiko zeruetan zer edo zer, beheko ibilbide hau arinduko jauskuekeena. Aiztu ezingo gozakeen arima izpiek jazak bidean lagun eta lagungarri dozakeenak, hik ondo dakik oin hori. Esan neunstan lehengoan, leku handi bat daukakeela gure memorian. Leku Handiago Bat sendi eta herritarron bihotzetan.
Ez jakiat ze filosofok esan ei joan, heriotz biologikoa jaukeela eta memoriaren heriotza.Эта азкен хау, геугаз джабикела эта геуган джаукила. Inoiz baino biziago hagolakoan ñagok herritar askoren bihotzetan. Betiko geratu haz geugaz Sabin. Бай, esaerak diñok: Heriotza ez dok azken berbea, lehenengo galdera baino . Ba, itaunketan segiduko joguk, baie esandakoa, noz edo noz botaixek argi izpiren batzuk geure ibilbidea erreztuteko.
Гонтзал Мендибил
Кантария
Предпосылки
ВведениеПолиовирусы, возбудители острого паралитического полиомиелита, имеют три серотипа и являются членами разновидностей человеческого энтеровируса С рода Enterovirus семейства Picornaviridae [1].Полиовирусы — это небольшие энтеровирусы человека без оболочки, в которых вирион состоит из 60 копий каждого из четырех капсидных белков (от VP4 до VP1), окружающих геном одноцепочечной полиаденилированной РНК с положительным смыслом 7500 нуклеотидов (нт). Вирусная РНК содержит длинную открытую рамку считывания, фланкированную 5′-нетранслируемой областью (UTR) и 3′-UTR. Один полипротеин, транслируемый с цепи РНК, сначала расщепляется на три предшественника полипротеина: P1, P2 и P3. P1 обрабатывается с образованием четырех капсидных белков: VP4, VP2, VP3 и VP1.P2 и P3 являются предшественниками неструктурных белков: от 2A до 2C и от 3A до 3D [2].
Трехвалентная пероральная вакцина против полиомиелита (ОПВ) содержит три различных серотипа полиовируса (тип 1, 2 и 3). Использование OPV позволяет коинфекцию клеток кишечника человека вакцинными штаммами типа 1, типа 2 и типа 3 и, таким образом, обеспечивает благоприятные условия для межтипной рекомбинации. Фактически, рекомбинация — очень частое явление в эволюции полиовируса и часто обнаруживается у пациентов с вакциноассоциированным паралитическим полиомиелитом (ВАПП) [3], [4], [5].Несмотря на то, что ОПВ безопасна, она может незаметно циркулировать среди населения с низким охватом вакцинацией в течение нескольких месяцев, а затем вернуться с аттенуирующего характера к нейровирулентному (полиовирусы вакцинного происхождения, ПВПВ), чтобы вызвать вспышку [6], [7] , [8], [9], [10], [11]. Циркулирующие VDPV (cVDPV) представляют собой штаммы, которые демонстрируют ≤99% гомологию последовательности кодирующей области VP1 с предковыми штаммами Sabin и могут вызывать устойчивую передачу от человека к человеку [11], [12]. Большинство штаммов цПВВП, за исключением штаммов китайских цПВВП [10], обладают последовательностями капсидных областей, а также неидентифицированными рекомбинантными некапсидными последовательностями; Считается, что эти последовательности происходят от видов энтеровируса С человека путем рекомбинации [6], [7], [8], [9].Две генетические характеристики, нуклеотидные мутации в ключевых участках детерминации нейровирулентности и генетические перестройки с человеческим энтеровирусом С вида, по-видимому, лежат в основе возникновения вспышек полиомиелита, связанных с цПВВП [7], [12], [13].
В то время как генетическая изменчивость полиовирусов в основном обусловлена заменами нуклеотидов в результате высокой частоты ошибок при репликации вирусной РНК [14], генетические изменения полиовирусов также могут происходить в результате молекулярной перестройки генома во время репликации вируса [15].Геномная перестройка полиовируса часто происходит посредством рекомбинации гомологичной РНК и, главным образом, в неструктурных кодирующих областях вирусного генома. Частота рекомбинации составляет около 2%, 53% и 79% полиовирусов типа 1, 2 и 3, соответственно, и показывает, что частота сильно зависит от серотипа полиовирусов [16]. Большинство сайтов кроссовера рекомбинантов типа 2 (рекомбинанты S2 / S1 и S2 / S3) лежат в кодирующей области P3, а большинство сайтов кроссовера рекомбинантов типа 3 (рекомбинанты S3 / S1 и S3 / S2) расположены в кодирующей области P2. [15], [17].С другой стороны, сайты кроссовера очень немногих рекомбинантов типа 3 (все были рекомбинантами S3 / S2) [18], [19], [20], [21] и только рекомбинантными 1 типа 2 (рекомбинантными S2 / S3) [ 5], расположены в кодирующей области P1.
В этом исследовании мы описываем 10 различных природных капсид-рекомбинантных полиовирусов типа 3 / типа 2, выделенных от девяти пациентов с острым вялым параличом (ОВП) и одного здорового вакцинированного в период вирусологического надзора 2001–2008 гг. В Китае. Первичная характеристика этих изолятов показала, что все первые сайты кроссовера этих 10 изолятов находились в кодирующей области VP1.Это наблюдение привело нас к изучению первичной структуры сайтов кроссовера, а также генетических и фенотипических свойств этих химер полиовируса.
Результаты Первичная характеристика вирусных изолятовВсе 10 вирусных изолятов были полностью нейтрализованы поликлональными антисыворотками, специфичными для типа 3, но не могли быть нейтрализованы антисыворотками для типа 2. Таким образом, все они были идентифицированы как полиовирусы 3 типа. Тесты на внутритиповую дифференциацию (ITD) проводили двумя разными методами.Полиморфизм длины рестрикционного фрагмента полимеразной цепной реакции (ПЦР-ПДРФ) ITD-тесты выявили типичные рестрикционные паттерны Sabin 3, за исключением одного штамма (CHN6356), который показал атипичный, не подобный Sabin паттерн (NSL). В тестах ITD иммуноферментного анализа (ELISA) четыре изолята были идентифицированы как сабиноподобные (SL), а два изолята (CHN5275 и CHN6053) были идентифицированы как двойной реактивный вирус (DRV), что указывает на их взаимодействие с обоими. Кроличья антисыворотка, специфичная для Sabin 2 и специфическая для дикого полиовируса 2 типа, перекрестно абсорбируется.Результаты ITD ELISA не были доступны для других четырех изолятов вируса из-за изменения алгоритма тестирования ITD, используемого в лаборатории (таблица 1).
10.1371 / journal.pone.0015300.t001 Таблица 1| Изоляты вируса | Регистрационный номер | Источник * | Возраст (лет) / Пол | ОПВ История | Даты | г.Внутритиповая дифференциация † | |||
| Последняя ОПВ | Начало | Отбор проб | PCR-RFLP | ELISA | |||||
| CHN5275 | FJ859183 | Чемодан AFP | 0.8 / F | 3 | 11 июня 2001 г. | 8 августа 2001 г. | 14 августа 2001 г. | SL | ДРВ |
| CHN6053 | FJ859184 | Чемодан AFP | 1,6 / М | 3 | Неизвестно | 28 января 2002 г. | 26 февраля 2002 г. | SL | ДРВ |
| CHN6060 | FJ859185 | Чемодан AFP | 0.7 / М | 1 | 5 декабря 2001 г. | 24 января 2002 г. | 4 февраля 2002 г. | SL | SL |
| CHN6213 | FJ859186 | Чемодан AFP | 0,8 / М | 1 | Неизвестно | 20 мая 2002 г. | 26 мая 2002 г. | SL | SL |
| CHN6218 | FJ859187 | Чемодан AFP | 1.5 / М | 1 | 5 декабря 2001 г. | 29 июня 2002 г. | 3 июля 2002 г. | SL | SL |
| CHN6356 | FJ859188 | Чемодан AFP | 0,4 / М | 2 | 15 августа 2002 г. | 6 сентября 2002 г. | 10 сентября 2002 г. | NSL | SL |
| CHN11144 | FJ859189 | Чемодан AFP | 0.4 / F | 1 | 16 июня 2007 г. | 17 июля 2007 г. | 27 июля 2007 г. | SL | ND |
| CHN11185h | FJ859190 | Здоровый вакцинированный | 1.0 / M | 1 | Неизвестно | – | 1 апреля 2007 г. | SL | ND |
| CHN12092 | FJ859191 | Чемодан AFP | 3.2 / М | 3 | 16 ноября 2005 г. | 9 сентября 2008 г. | 9 сентября 2008 г. | SL | ND |
| ЧН12121 | FJ859192 | Чемодан AFP | 0,3 / M | 1 | 1 июля 2008 г. | 15 августа 2008 г. | 22 августа 2008 г. | SL | ND |
* AFP: Острый вялый паралич.
†SL: как у Сабина; NSL: не похож на Сабина; DRV: вирус двойной реакции; Н.Д .: не сделано.
Полные кодирующие последовательности VP1 10 изолятов полиовируса выявили их необычные геномные интертипные (тип 3 / тип 2) рекомбинанты с сайтами кроссовера в области, кодирующей капсид VP1. Было обнаружено, что последние от 55 до 136 нуклеотидов на 3′-конце кодирующей области VP1 имеют высокое сходство (0–1 нуклеотидные замены) со штаммом Sabin 2, в то время как остальная часть кодирующей области VP1 имеет высокое сходство со штаммом Sabin 3. штамм (1–4 нуклеотидных замены и 99.37–99,87%), которые показали связанные с вакцинами геномные особенности и выявили, что все их сайты кроссинговера расположены в кодирующей области VP1 (рис. 1).
10.1371 / journal.pone.0015300.g001 Рисунок 1Желтыми открытыми прямоугольниками обозначены возможные участки пересечения.
Полное геномное секвенирование 10 природных межтипных рекомбинантов капсида полиовируса типа 3 / типа 2 с первыми сайтами кроссовера в кодирующей области VP1 (далее — рекомбинанты капсида VP1) показало, что их геномы коллинеарны с этим штамма Sabin 3 и несколько мутаций были разбросаны по геномам.Нуклеотидные замены, которые были идентифицированы как основные детерминанты ослабленного фенотипа штамма Sabin 3, вернулись через переход U-to-C в nt472 в области 5′-UTR и переход C-to-U в nt 2493 в кодирующей области VP1, что приводит к аминокислотной замене Thr-to-Ile остатка 6 VP1 во всех 10 изолятах. Штамм CHN11185h также продемонстрировал реверсию перехода из U в C в nt2034 в кодирующей области VP3, другой важной детерминанте нейровирулентности полиовирусов типа 3, которая приводит к замене аминокислоты Phe на Ser в остатке 91 VP3 [22], [23] (Таблица 2).
10.1371 / journal.pone.0015300.t002 Таблица 2| Изолят вируса | Нуклеотид и аминокислота детерминант нейровирулентности | Схема рекомбинации | Эволюция вирусов * | |||||
| 5′-UTR | VP3 | VP1 | ||||||
| NT472 | NT2034 | aa91 | NT2493 | aa6 | Ks (дни) | Kt (дни) | ||
| P3 / Sabin | U | U | Phe | C | Thr | – | – | – |
| CHN5275 | С | U | Phe | U | Иль | S3 / S2 / S3 | 0.34 (38 д) | 0,27 (88 д) |
| CHN6053 | С | U | Phe | U | Иль | S3 / S2 / S3 | 0,56 (63 г) | 0,39 (127 г) |
| CHN6060 | С | U | Phe | U | Иль | S3 / S2 / S3 | 0.47 (53 д) | 0,24 (79 д) |
| CHN6213 | С | U | Phe | U | Иль | S3 / S2 / S3 | 0,35 (39 г) | 0,24 (79 д) |
| CHN6218 | С | U | Phe | U | Иль | S3 / S2 / S3 | 0.46 (52 д) | 0,24 (79 д) |
| CHN6356 | С | U | Phe | U | Иль | S3 / S2 / S3 | 0,35 (39 г) | 0,20 (65 д) |
| CHN11144 | С | U | Phe | U | Иль | S3 / S2 / S1 / S2 / S1 | 0.58 (65 д) | 0,36 (118 г) |
| CHN11185h | С | С | Ser | U | Иль | S3 / S2 / S3 | 1,07 (120 г) | 0,36 (118 г) |
| CHN12092 | С | U | Phe | U | Иль | S3 / S2 / S3 | 0.46 (52 д) | 0,32 (105 г) |
| ЧН12121 | С | U | Phe | U | Иль | S3 / S2 | 0,46 (52 д) | 0,20 (65 д) |
| P3 / Леон / 37 | С | С | Ser | U | Иль | – | – | – |
Заштрихованная область указывает нуклеотиды и аминокислоты, которые были идентичны штамму Sabin 3, нумерация соответствует штамму Sabin 3 (номер доступа GenBank: AY184221).
Антигенная дивергенция рекомбинантов капсида VP1Результаты метода ITD ELISA показали, что штаммы CHN5275 и CHN6053 представляют собой два антигенных варианта штамма Sabin 3; однако все 10 изолятов были полностью нейтрализованы поликлональными антисыворотками к полиовирусу 3 типа, но не антисыворотками против полиовируса 2 типа, в соответствии со стандартной процедурой [24]. Аминокислотные последовательности в пределах или рядом с предсказанными сайтами нейтрализующего антигена (NAg) [25] были сопоставлены с рекомбинантами капсида 10 VP1, штаммом Sabin 3 и его нейровирулентным предшественником (Leon / USA / 1937), штаммом Sabin 2 и некоторым диким типом 3. полиовирусы, циркулировавшие в разных частях мира в период 1960–2004 гг.Среди этих рекомбинантов капсида VP1 было четыре аминокислотных замены в сайтах NAg: одна замена была в NAg1 (штамм CHN6356, VP1-98: Arg на Gln), вторая — в NAg2 (штамм CHN11144, VP2-165: Ala на Thr) , третий — в NAg3a (штамм CHN12092, VP3-59: от Ser к Gly) и четвертый — в NAg3b (штамм CHN6053, VP3-78: от Ser к Phe). Кроме того, весь NAg3a (от VP1-286 до VP1-290) в кодирующей области VP1 был полностью заменен на аминокислотные последовательности, специфичные для Sabin 2 (фиг. 1).
Интересно, что аминокислота NAg3a в белке VP1 диких полиовирусов типа 3, которые циркулировали во всем мире после 1980 г., была подобна аминокислоте штамма Sabin 2, а аминокислотные последовательности были идентичны между VP1-286 и VP1-289.Дикие полиовирусы типа 3, выделенные из Анголы и Туниса, также имеют одинаковые остатки VP1-290, а дикие полиовирусы типа 3, выделенные из Нигерии, Индии, Пакистана и Афганистана, где дикие полиовирусы все еще циркулируют, имеют другой остаток в VP1-290. (от Тр до Ала). Нейровирулентный предшественник Sabin 3 (Leon / USA / 1937) также имел остаток Lys в VP1-286, который был идентичен таковому у штамма Sabin 2 (фиг. 2).
10.1371 / journal.pone.0015300.g002 Рисунок 2Прямоугольник показывает смещение NAg3a в VP1 от Sabin 3 до Sabin 2 из-за рекомбинации. Пунктирный прямоугольник показывает NAg3a диких полиовирусов типа 3, циркулировавших после 1980 г.
Особенности рекомбинации рекомбинантов капсида VP1Было обнаружено, что восемь из десяти рекомбинантов капсида VP1 (штаммы CHN5275, CHN6053, CHN6060, CHN6213, CHN6218, CHN6356, CHN1185h и CHN12092) имеют рекомбинацию в двух сайтах кроссовера: геном был последовательностью Сабина 3; средняя часть была последовательностью Сабина 2; а 3′-часть была последовательностью Sabin 3 (S3 / S2 / S3).Первые сайты кроссовера были расположены в кодирующей области VP1, а вторые сайты кроссовера были в области P3, но в разных положениях, которые можно было идентифицировать во всех четырех неструктурных кодирующих областях (3A, 3B VPg , 3C или 3D Pol ) (рис.3 и рис.4).
10.1371 / journal.pone.0015300.g003 Рисунок 3(а): схематическая генетическая организация эталонного штамма Sabin 3 (номер доступа в GenBank AY184221).Единственная открытая рамка считывания, окруженная 5′-UTR и 3′-UTR, обозначена прямоугольником. (b): структуры 10 интертипных рекомбинантов капсида типа 3 / типа 2 по Сэбину; Указаны последовательности полиовируса типа 1, типа 2 и типа 3 (сокращенно S1, S2 и S3 соответственно). Символ ▾ указывает на расположение сайтов кроссовера S3 / S2; символ ▽ указывает на расположение сайтов кроссовера S2 / S3; символ • указывает на расположение узлов кроссовера S2 / S1; а символ ○ указывает расположение сайтов кроссовера S1 / S2.Позиции сайтов кроссовера указаны вверху каждого из символов.
Для каждого графика имена вирусов из запрашиваемой последовательности указывались в правом нижнем углу, а для каждого анализа загрузочного сканирования имена вирусов из запрашиваемой последовательности указывались в нижнем левом углу.
CHN12121 был проще в том, что он имел только один сайт кроссовера, расположенный между nt3260 и nt3261 в кодирующей области VP1; 5′-часть генома была последовательностью Sabin 3, а 3′-часть была последовательностью Sabin 2 (S3 / S2) (фиг. 3 и фиг. 4).
Штамм CHN11144 был редким и сложным мультирекомбинантным полиовирусом, и его геномная организация была охарактеризована как тетрарекомбинантный S3 / S2 / S1 / S2 / S1. Полные геномные последовательности показали наличие четырех сайтов кроссовера.Первый был связан с событием рекомбинации S3 / S2 с сайтом кроссовера, расположенным между nt3233 и nt3240 в кодирующей области VP1, в то время как второй сайт кроссовера был от события рекомбинации S2 / S1, расположенного между nt5156 и nt5157 в кодирующей области 3A. Третий и четвертый сайты кроссовера были от событий рекомбинации S1 / S2 и S2 / S1, с двумя сайтами кроссовера, расположенными в nt6116-6126 и nt6726 в 3D кодирующей области, соответственно (Fig. 3 and Fig. 4).
Хотя количество и положения сайтов кроссинговера были разными среди 10 рекомбинантов капсида VP1, все они имели первые сайты кроссинговера, расположенные в кодирующей области VP1.Длины между сайтами кроссовера и 3′-концом кодирующей области VP1 варьировались от 55 до 136 нуклеотидов, а сайты кроссовера штаммов CHN6218, CHN11144, CHN11185h и CHN12092 располагались между nt3233 и nt3240, что давало самые длинные участки донорские последовательности генома Sabin 2 в литературе для этого типа рекомбинации полиовируса к настоящему времени (нумерация относится к геномным последовательностям Sabin 3, номер доступа GenBank AY184221) (рис. 1).
Хотя нуклеотиды разной длины (от 55 до 136 нуклеотидов) были введены в кодирующую область VP1 в каждом из рекомбинантных изолятов, четыре аминокислоты заменены (VP1-286: Arg на Lys, VP1-287: Asn на Asp, VP1-288: Что касается Gly, и VP1-290: Asp to Thr) в Nag3a были введены среди этих десяти рекомбинантов капсида VP1, что привело к полной замене NAg3a этих десяти рекомбинантов на аминокислотные последовательности, специфичные для Sabin 2.
Температурная чувствительностьВсе 10 рекомбинантов капсида VP1 сравнивали со штаммом P3 / Sabin в отношении репликационной способности при повышенной температуре (40 ° C) и показали разные результаты по температурной чувствительности. P3 / Sabin был чувствителен к температуре, как и ожидалось, с уменьшением титра более чем на 2 логарифма при 36 ° C / 40 ° C, и пять рекомбинантов капсида VP1 (CHN5275, CHN6060, CHN6218, CHN6356 и CHN12121) показали результаты, аналогичные результатам, полученным для штамма P3 / Sabin, в то время как свойство температурной чувствительности других пяти рекомбинантов капсида VP1 показало определенно меньший эффект (титры уменьшились менее чем на 2 логарифма при 36 ° C / 40 ° C), это означает, что эффективность их репликации остается неизменной даже при повышенных температурах (таблица 3).
10.1371 / journal.pone.0015300.t003 Таблица 3| Температура роста и титр вируса | ||||||
| 36 ° С | 40 ° С | Логарифмическое уменьшение титра 36 ° C / 40 ° C | ||||
| Штамм вируса | 8 л. С.я. | 24 ч в сутки | 8 л.с. | 24 ч в сутки | 8 л.с. | 24 ч в сутки |
| P3 / Sabin | 6.500 | 8,250 | 3,250 | 3,750 | 3,250 | 4.500 |
| CHN5275 | 8.500 | 8,875 | 7.000 | 6,750 | 1,500 | 2,125 |
| CHN6053 | 7,625 | 8,250 | 7,500 | 7,500 | 0,125 | 0,750 |
| CHN6060 | 8.375 | 8,875 | 6,875 | 6,625 | 1,500 | 2,250 |
| CHN6213 | 7,875 | 8.125 | 6,750 | 6,750 | 1,125 | 1,375 |
| CHN6218 | 7.750 | 7,875 | 6.125 | 5,625 | 1,625 | 2,250 |
| CHN6356 | 8.000 | 7,875 | 6.125 | 5,625 | 1,875 | 2,250 |
| CHN11144 | 8.250 | 8,750 | 7,125 | 7,375 | 1,125 | 1,375 |
| CHN11185h | 8,500 | 9.000 | 7,125 | 7,125 | 1,375 | 1,875 |
| CHN12092 | 8.500 | 8,500 | 7,250 | 7,125 | 1,250 | 1,375 |
| ЧН12121 | 8.000 | 8,375 | 5,750 | 5,125 | 2,250 | 3,250 |
* Ks: синонимичные замены, Kt: общие замены.
Оценка времени эволюции рекомбинантов капсида VP1Приблизительное время эволюции полиовирусов оценивали по разнице последовательностей P1 / капсида между рекомбинантами капсида VP1 и эталонным штаммом Sabin 3. Скорректированная доля синонимичных замен (Ks) составляла 0,33–1,07% синонимичных сайтов в области P1 / капсида (не включая рекомбинантные последовательности донора), а от общего количества замен (Kt) составляла 0,20–0,39%. В предположении постоянной скорости нуклеотидных замен 3.2% синонимичных замен на синонимичные сайты в год и 1,1% общих замен на сайт в год в области P1 / капсида [26], мы оценили, что возраст рекомбинантов капсида VP1 составлял 38–120 дней (по оценке Ks) и 65–127 дней (по оценке Kt) соответственно.
ОбсуждениеПолиовирус — один из первых признанных вирусов, подвергшихся рекомбинации [27]. Рекомбинация часто обнаруживается у диких полиовирусов, ПВВП и вакцин-связанных полиовирусов [5], [28], [29].Обычно первый сайт кроссовера находится в неструктурной области P2 или P3 и часто в области 3D-кодирования [15]. Естественная межтипная рекомбинация капсида между штаммами Сэбина — относительно редкое явление, возможно, из-за структурных ограничений, которые поддерживают целостность оболочки капсида. Целостность капсидной области полиовируса, по-видимому, очень важна для распространения самих вирусов. Некоторые эксперименты in vitro показали, что если сайт кроссовера расположен в области, кодирующей капсид, интертипная рекомбинантная химера будет нежизнеспособна [30]; кроме того, некоторые другие эксперименты показали, что по сравнению с его родительскими штаммами межтипная рекомбинантная химера с перекрестным сайтом в области, кодирующей капсид, нестабильна [31].
О некоторых подобных интертипных рекомбинантных химерах сообщалось ранее [18], [19], [20], [21], но, насколько нам известно, вставка из 136 нуклеотидов является самой длинной донорной последовательностью, о которой сообщалось, поэтому самая длинная В данном документе сообщалось о вставке полиовируса типа 2 в кодирующую область VP1 рекомбинантного капсида полиовируса.
Хотя первые сайты кроссовера отличались друг от друга среди 10 рекомбинантов капсида VP1, все они получали аминокислоты NAg3a типа 2 в белке структуры VP1 на фоне Sabin 3.Хотя замена NAg3a в этих рекомбинантных вирусах может привести к частичным антигенным изменениям, как показано ранее [18], [20], общая антигенная структура типа 3 существенно не изменилась, поскольку все вирусные изоляты легко нейтрализовались поликлональной сывороткой типа 3. Это означало, что NAg3a, возможно, изменил некоторые из антигенных свойств, специфичных для типа 3, но что Sabin 3 не приобрел каких-либо характеристик, специфичных для типа 2, возможно, на основании того факта, что вставленная NAg3a типа 2 расположена на поверхности вириона и участвует в связывании рецепторов, обеспечивая большую свободу для аберрантного сворачивания [32].
Аминокислота NAg3a штамма Sabin 3 кажется нетипичной; другие изоляты дикого полиовируса типа 3, которые циркулировали во всем мире в последние годы (после 1980 г.), имеют последовательности NAg3a, более похожие на штамм Sabin 2. Но изоляты дикого полиовируса типа 3, полученные ранее (до 1967 года), все еще имеют последовательности NAg3a, более похожие на штамм Sabin 3. Существует вероятность того, что недавние изоляты дикого полиовируса типа 3 могут быть рекомбинантными, имеющими последовательности NAg3a, полученные из другого штамма в период с 1967 по 1980 год.Это кажется вероятным, но трудно доказать, что, возможно, события рекомбинации типа 3 / типа 2 на 3′-конце кодирующей области VP1 могут иметь более высокую пригодность.
Результаты оценки возраста привели нас к реконструкции потенциальных историй этих клинических изолятов. Штаммы OPV реплицировались в кишечнике человека в течение 38–120 дней (по оценке Ks) и в течение 65–127 дней (по оценке Kt) после введения начальных доз OPV. Основываясь на том факте, что вакцинные вирусы типа 2 и типа 3 могут реплицироваться и выделяться иммунокомпетентными вакцинированными в течение примерно 3 месяцев после вакцинации [33], и учитывая небольшой разброс в возрасте, вероятность того, что каждое конкретное событие рекомбинации произошло у человека, от которого нельзя исключить образец кала, в котором был выделен вирус.В течение короткого периода времени нуклеотидные замены и генетические обмены были выбраны очень быстро, вероятно, в ответ на различные селективные преимущества, чтобы повысить приспособленность штаммов Сэбина к репликации в кишечнике человека за счет предотвращения накопления вредных мутаций.
Ограничение метода оценки эволюции, используемого в этом исследовании, заключается в том, что этот подход предполагает фиксированную скорость замен и умножает ее на расчетное количество нуклеотидных замен (общее количество замен или синонимичных замен), но на самом деле фактическое количество Эволюция (количество замен) в основном зависит от эффективного размера популяции вируса внутри хозяина и частоты репликации.Кроме того, события рекомбинации могут привести к изменению давления отбора и, наиболее вероятно, будет усиление отбора, что приведет к увеличению скорости эволюции, а это означает, что возраст рекомбинантов капсида VP1 мог быть переоценен. Это наиболее очевидно в случае CHN11144, расчетный возраст которого (65 дней по оценке Ks или 118 дней по оценке Kt) больше, чем время от введения OPV до отбора проб (41 день).
Все дети принимали одну или несколько OPV перед взятием образцов, а интервалы между датами введения последней OPV и взятием образцов составляют от 26 до 1027 дней, что указывает на то, что не все природные рекомбинанты капсида VP1, непосредственно полученные из штаммов OPV, которые они получили. скорее всего, некоторые дети пострадали от них из окружающей среды.Были доказательства того, что, как и другие вакциноподобные полиовирусы, рекомбинанты капсида VP1 могут выживать и обнаруживаться в сточных водах окружающей среды [21].
Генетическое ослабление обычно снижает приспособленность вируса, и все рекомбинанты капсида VP1 имели нуклеотидные замены U-to-C в nt472 в области 5′-UTR и переход C-to-U в nt 2493, что приводило к Thr-to-C. — Простая замена остатка 6 VP1, и это были прямые реверсии к нейровирулентному предшественнику Sabin 3, Леон / США / 1937.Эти две нуклеотидные замены также часто обнаруживались в штаммах VDPV типа 3, включая изоляты VDPV 2002 из сточных вод в Эстонии [34], изоляты iVDPV 2006 года от иранского ребенка [35] и в родственных Sabin 3 полиовирусах [36], что может указывать на то, что эти «горячие точки» столкнулись с интенсивным селективным давлением, поскольку штамм OPV реплицировался в кишечнике человека.
Пять рекомбинантов капсида VP1 (CHN5275, CHN6060, CHN6218, CHN6356 и CHN12121) не утратили чувствительный к температуре фенотип родительского штамма P3 / Sabin.Этот результат отличался от трех ранее описанных рекомбинантов капсида, которые почти полностью утратили температурную чувствительность [18], [19], [20], но были похожи на недавний отчет [21], а другие пять рекомбинантов капсида VP1 в этом исследовании имели почти полностью утратил температурочувствительный фенотип. Сообщалось, что фенотип температурной чувствительности полиовируса типа 3 в основном объясняется различием в остатке 91 капсидного белка VP3 [37], но эту аминокислотную замену не удалось обнаружить в рекомбинантах капсида VP1 в этом исследовании, за исключением штамма. CHN11185h (Таблица 2), и этим можно объяснить сохранение термочувствительного фенотипа вирусов.Помимо остатка 91 в области капсида VP3, было предположено, что 11 других аминокислотных замен связаны с температурной чувствительностью, четыре в области VP1 (остатки 34, 54, 132 и 263), четыре в области VP2 (остатки 146, 200, 215 и 265). ) и три в области VP3 (остатки 108, 175 и 178) [37]. Среди них замена Ala на Thr или Ala на Val в положении 54 в капсидной области VP1 была обнаружена в штаммах CHN5275, CHN6053 и CHN12092.
В заключение, были выделены и охарактеризованы 10 природных интертипных VP1-рекомбинантных капсид-капсид полиовирусов типа 3 / типа 2, в которых первые сайты кроссовера оказались в кодирующей области VP1.Несмотря на полную замену NAg3a аминокислотами, специфичными для типа 2, серотипы рекомбинантов не были изменены, и они были полностью нейтрализованы поликлональными антисыворотками типа 3, но никак не антисыворотками типа 2. NAg3a штамма Sabin 3 кажется нетипичным; другие изоляты полиовируса дикого типа, циркулировавшие в последние годы, имеют последовательности NAg3a, более похожие на штамм Sabin 2. Возможно, что недавние изоляты дикого полиовируса типа 3 могут быть рекомбинантными, имеющими последовательности NAg3a, полученные из другого штамма в период между 1967 и 1980 годами, и события рекомбинации типа 3 / типа 2 на 3′-конце кодирующей области VP1 могут привести к более высокая физическая подготовка.
Материалы и методы Образцы инструментовВ этом исследовании не участвовали люди и не проводились эксперименты на людях, единственным используемым материалом являются образцы стула, собранные у пациентов с ОВП для целей общественного здравоохранения, инициированные Всемирной организацией здравоохранения и Министерством здравоохранения Китая, и письменное информированное согласие всех участников, участвовавших в этом исследовании, было получено на использование их образцов стула. Это исследование было одобрено на второй сессии Комитета по этике Китайского центра по контролю и профилактике заболеваний.
10 полиовирусов типа 3 были изолированы от девяти больных ОВП (из провинций Цзянси, Хэнань, Юньнань, Гуандун, Ганьсу, Гуйчжоу, Хубэй и Хэбэй) и здорового вакцинированного (из автономного района Сицзан) в период 2001–2008 годов в Китае. . Все пациенты с ОВП были моложе 1,6 года, когда у них появились симптомы, за исключением одного пациента из провинции Хубэй (3,2-летнего мальчика). Все дети с ОВП получили по крайней мере одну дозу ОПВ после рождения; однако неизвестно, когда здоровый вакцинированный из Автономного района Сицзан получил дозу ОПВ, поскольку не удалось найти письменную запись об этом.На момент обращения ни у одного из пациентов с ОВП не было признаков иммунодефицита. У каждого из девяти пациентов с ОВП были взяты по два образца стула с интервалом 24 часа в течение 14 дней после появления симптомов. Один образец стула был взят у здорового вакцинированного во время эпидемиологического исследования охвата ОПВ в 2007 году (таблица 1).
Выделение вирусов и первичная идентификация клеточных линийRD (рабдомиосаркома человека) и L20B (мышиные L-клетки, экспрессирующие рецептор полиовируса человека) использовали для выделения вирусов из образцов стула стандартными процедурами [24].Все L20B-положительные изоляты были идентифицированы с помощью теста микронейтрализации с использованием кроличьей поликлональной антисыворотки, специфичной для определенного типа полиовируса (Национальный институт общественного здравоохранения и окружающей среды [RIVM], Билтховен, Нидерланды) [24]. Два метода ITD, оба нацеленные на кодирующую область VP1, были использованы для исследования дикого или вакцинного происхождения изолятов полиовируса. Во-первых, мы использовали метод ПЦР-ПДРФ, основанный на генетических свойствах полиовирусов [38]; этот метод идентифицировал полиовирус как типичный SL или атипичный NSL.Затем мы применили метод ELISA, основанный на антигенных свойствах полиовирусов [39]; с помощью этого метода изоляты полиовируса были классифицированы в одну из следующих четырех различных групп, сформированных на основе антигенных свойств: SL, NSL, DRV и нереактивный вирус (NRV).
Экстракция вирусной РНК и обратная транскрипция.Вирусные РНК экстрагировали из вирусных изолятов с использованием мини-набора для вирусной РНК QIAamp (Qiagen, Валенсия, Калифорния, США) и хранили при -80 ° C для дальнейшего использования.1 мкл (200 ед.) Рибонуклеазы H-обратной транскриптазы SuperScript II (invitrogen, США) использовали для получения одноцепочечной кДНК из 5 мкл каждой очищенной вирусной РНК. Синтезы кДНК примировали 7500A и Q8 (таблица 4), соответственно, и проводили при 42 ° C в течение 2 часов, а затем при 60 ° C в течение 15 минут для инактивации фермента. Наконец, РНК в гибриде РНК: ДНК специфически расщепляли 1 мкл рибонуклеазы H (Promega, США) при 37 ° C в течение 30 мин.
10.1371 / journal.pone.0015300.t004 Таблица 4| Праймер | Положение нуклеотида (нуклеотид) | Последовательность праймера (5-3) | Ориентация | Номер ссылки |
| 0001S48a | GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTTAAAACAGCTCTGGGGTT | Вперед | [6] | |
| EV / PCR-2 | 449–473 | TCCGGCCCCTGAATGCGGCTAATCC | Вперед | [42] |
| EV / PCR-1 | 537–562 | ACACGGACACCCAAAGTAGTCGGTCC | Реверс | [42] |
| 1275S | 1275–1294 | ACGTGCAGTGTAATGCATCC | Вперед | Это исследование |
| 1511A | 1492–1511 | TTCCCAGTAACACCCCACAT | Реверс | Это исследование |
| 1949S | 1949–1969 | AACACAATGGACATGGTATAG | Вперед | Это исследование |
| 2224A | 2205–2224 | ACATGTGTGCCCAACATAGC | Реверс | Это исследование |
| Y7a | 2397–2419 | GGTTTTGTGTCAGCGTGTAATGA | Вперед | [43] |
| 2873A | 2853–2873 | GAATTCCATGTCAAATCTAGA | Реверс | Это исследование |
| 3368S | 3368–3389 | AACGACTTATGGATTTGGACAC | Вперед | Это исследование |
| Q8a | 3477–3496 | AAGAGGTCTCTRTTCCACAT | Реверс | [43] |
| 4443S | 4443–4465 | AAYTACATACAGTTCAAGAGCAA | Вперед | [5] |
| 4489A | 4468–4489 | AAACATACTGGCTCAATACGGT | Реверс | [6] |
| 5076S | 5076–5097 | GGTAATTGCATGGAAGCTCTAT | Вперед | Это исследование |
| 5274A | 5253–5274 | GGTTGATGTTCCTCTCTGTTTG | Реверс | Это исследование |
| 5904S | 5904–5929 | GGGATGCATGTYGGIGGGAACGGTTC | Вперед | Это исследование |
| 6097A | 6077–6097 | GGTTCCTTAACTCCTTCAAAC | Реверс | [6] |
| 6914S | 6914–6934 | CTACAAGGGCCTAGATTTAGA | Вперед | [5] |
| 6970A | 6951–6970 | ATTACATCATCACCATAGGC | Реверс | Это исследование |
| 7500Aa | GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGG (T) 24 | Реверс | [6] |
Пары праймеров Y7 / 7500A и 0010S48 / Q8 рекомендуются для длительной удаленной ПЦР.Ожидаемые ампликоны от них имеют размер 5,28 т.п.н. и 3,57 т.п.н. соответственно.
Полноразмерная амплификация геномаДве отдаленные амплификации ПЦР (для одного вируса) были выполнены с использованием системы TaqPlus Precision PCR (Stratagene, США), которая состоит из смеси клонированной Stratagene ДНК-полимеразы Pfu (контрольное считывание) и ДНК Taq2000. полимераза (непроверенное считывание). Реакции содержали 5 мкл кДНК (см. Выше), 0,1 мМ каждого dNTP, 10 мкл буфера TaqPlus, 1,0 нг / мкл прямого (0001S48 или Y7) и обратного (Q8 или 7500A) праймера (таблица 4) и 5 единиц TaqPlus. фермент в 100 мкл реакции.Амплификацию проводили путем 30-кратного переключения температурных уровней 94 ° C (30 с), 60 ° C (30 с) и 72 ° C (6 мин), а затем еще двух температурных уровней 94 ° C ( 1 мин) и 72 ° C (20 мин).
Секвенирование нуклеиновых кислотДва продукта ПЦР с длинным удалением (для одного вируса) очищали с использованием набора для экстракции геля QIAquick (Qiagen, Валенсия, Калифорния, США). Реакции циклического секвенирования проводили с использованием версии 3.0 программы BigDye terminator Chemistry (Applied Biosystems) с использованием праймеров, перечисленных в таблице 4.Секвенирование выполняли в обоих направлениях с использованием генетического анализатора ABI PRISM 3100 (Applied Biosystems), и каждое положение нуклеотида секвенировали по крайней мере один раз для каждой цепи. Последовательности 5′-сегмента определяли с использованием набора ядер 5′-концов быстрой амплификации концов кДНК (Takara Biomedicals) в соответствии с инструкциями производителя.
Расположение сайтов кроссовераПоследовательности изолятов выравнивали с эталонными штаммами с помощью программы MEGA v4.0 (Судхир Кумар, Университет штата Аризона, Аризона, США) [40]; Полученные последовательности эталонных штаммов оказались последовательностями GenBank под номерами доступа AY184219, AY184220 и AY184221 для Sabin 1, Sabin 2 и Sabin 3 соответственно.Графики нуклеотидного сходства были созданы с помощью программы SimPlot v3.5.1 (Stuart Ray, Johns Hopkins University, Baltimore, Maryland, USA) [41]. Сайты кроссовера были идентифицированы как расположенные между последним нуклеотидом, что отличает клиническую последовательность от эталонных последовательностей 3′-партнера, и первым нуклеотидом, что отличает клиническую последовательность от эталонной последовательности 5′-партнера.
Анализ температурной чувствительностиТемпературную чувствительность 10 природных полиовирусов, рекомбинантных с капсидом типа 3 / типа 2, определяли на однослойных клетках RD в 24-луночных планшетах, как описано ранее [18].Вкратце, 24-луночные планшеты инокулировали 50 мкл неразбавленных исходных вирусов (P3 / Sabin и 10 VP1-рекомбинантов капсида). И были использованы два разных инкубатора; температура одного инкубатора была доведена до 36 ° C (оптимальная температура для размножения вируса), а температура другого инкубатора была доведена до 40 ° C (супраоптимальная температура для размножения вируса). После абсорбции при 36 ° C или 40 ° C в течение 1 ч неабсорбированные вирусные инокуляты удаляли, в каждую лунку добавляли 100 мкл поддерживающей среды и планшеты непрерывно инкубировали при 36 ° C или 40 ° C отдельно.Через 8 и 24 часа после инфицирования планшеты собирали, и 50% инфекционную дозу культуры клеток (CCID 50 ) рассчитывали методом конечной точки разведения на монослойных клетках RD в 96-луночных планшетах при 36 °. С. Изолят вируса, показывающий снижение титров более чем на 2 логарифма при различных температурах, считался чувствительным к температуре.
Оценка даты инициирования дозы OPVДата инициирования дозы OPV для каждого пациента оценивалась по значениям Ks (синонимичные замены на одно синонимичное место) и Kt (все замены на сайт), предполагая, что скорость эволюции равна 0.032 синонимических замены на синонимичный сайт в год и 0,011 общих замен на сайт в год [26].
Номера нуклеотидных последовательностейПолные геномные последовательности 10 природных полиовирусов, рекомбинантных с капсидом типа 3 / типа 2, описанных в данном исследовании, были депонированы в базе данных GenBank под номерами доступа FJ859183 — FJ859192.