2 теста показали слабую вторую полоску: Обычные 2 теста показали вторую слабую полоску,а электронный показал что беременности нет. Чему верить?

Это дифференциальная среда.Это богатая и сложная среда, содержащая 5% эритроцитов барана. BAP проверяет способность организма производить гемолизины, ферменты, повреждающие / лизирующие эритроциты (эритроциты). Степень гемолиза этими гемолизинами помогает дифференцировать представители родов Staphylococcus , Streptococcus и Энтерококк .

• Бета-гемолиз — это полный гемолиз.Для него характерно четкое (прозрачная) зона, окружающая колонии. Staphylococcus aureus , Streptococcus pyogenes и Streptococcus agalactiae являются b-гемолитическими (рисунок слева внизу показывает бета-гемолиз S. pyogenes ).
• Частичный гемолиз называется альфа-гемолизом. Колонии обычно окружен зеленой непрозрачной зоной. Streptococcus pneumoniae и Streptococcus mitis являются a-гемолитическими (на картинке справа внизу показан а-гемолиз S.mitis ).
• Если гемолиза не происходит, это называется гамма-гемолизом. Нет заметные зоны вокруг колоний. Staphylococcus epidermidis — гамма-гемолитический.

Какой тип гемолиза наблюдается на каждом из следующих тарелки?

ТОП

Полоса-удар техника

Часто при посеве БАТ для наблюдения за структурой гемолиза исследователи также несколько раз проткнет агар петлей для посева.Этот укол позволяет обнаружить стрептолизин О, специфический гемолизин, продуцируемый Streptococcus pyogenes. Этот гемолизин инактивируется O ₂ и обнаруживается только под поверхностью (в анаэробных условиях). окружающая среда) вокруг метки удара. Обратите внимание на овальные участки просвета. вокруг меток на картинке ниже; они вызваны стрептолизином О.

желчь Эскулин агар

Это среда, которая является одновременно селективной и дифференциальной.Это тесты способность организмов гидролизовать эскулин в присутствии желчи. Он обычно используется для идентификации представителей рода Enterococcus ( E faecalis и E. faecium ).

Первый селективный ингредиент в этом агаре — желчь, подавляющая рост грамположительных кроме энтерококков и некоторых стрептококков разновидность. Второй селективный ингредиент — азид натрия.Этот химикат подавляет рост грамотрицательных бактерий.

Дифференциальный ингредиент — эскулин. Если организм может гидролизоваться эскулин при наличии желчи образуется продукт эскулетин. Эскулетин реагирует с цитратом железа (в среде), образуя фенольный комплекс железа, который превращает весь наклон в темно-коричневый в черный. Крайняя правая пробирка была засеяна E. faecalis (положительный результат).Пробирка в центре была засеяна. с микроорганизмом, отрицательным по желчному эскулину, и трубкой слева был незаражен.

ТОП

Сера Indole Motility Media (SIM)

Этот тест используется для идентификации микроорганизмов, содержащих фермент цитохром. оксидаза (важна в цепи переноса электронов).Это обычно используется для различения оксидазонегативных Enterobacteriaceae и положительный по оксидазе Pseudomadaceae .

Цитохромоксидаза переносит электроны из цепи переноса электронов до кислорода (конечный акцептор электронов) и восстанавливает его до воды. В предоставляются оксидазный тест, искусственные доноры и акцепторы электронов. Когда донор электронов окисляется цитохромоксидазой, он превращается в темно фиолетовый.Это считается положительным результатом. На картинке ниже организм справа ( Pseudomonas aeruginosa ) — оксидаза положительный.

ТОП

Коагулаза — фермент, свертывающий плазму крови. Этот тест проводится на грамположительных, каталазоположительных видов для идентификации коагулазо-положительного Staphylococcus aureus. Коагулаза является фактором вирулентности S. aureus. Формирование сгустка вокруг инфекции, вызванной этими бактериями, вероятно, защищает это от фагоцитоза. Этот тест позволяет отличить Staphylococcus aureus от других коагулазонегативных видов стафилококков.

ТОП

Это дифференциальный тест, используемый для различения чувствительных организмов. к антибиотику бацитрацину и другим.Бацитрацин — пептид антибиотик, продуцируемый Bacillus subtilis . Подавляет клеточную стенку синтез и разрушает клеточную мембрану. Этот тест обычно используется различать b-гемолитические стрептококки: Streptococcus agalactiae (резистентный к бацитрацину) и Streptococcus pyogenes (чувствительный к бацитрацину). Пластина внизу была испещрена Streptococcus pyogenes ; обратите внимание на большую зону торможения окружающий диск.

ТОП

Это дифференциальный тест, используемый для различения чувствительных организмов. к антибиотику оптохину и тем нет. Этот тест используется для различения Streptococcus pneumoniae (оптохин чувствительный (на фото справа ниже)) от других а-гемолитических стрептококков (резистентный к оптохину ( Streptococcus mitis на фото слева ниже)).

ТОП

Эта среда является одновременно селективной и дифференциальной. Избирательный ингредиенты — соли желчных кислот и краситель, кристаллический фиолетовый, который подавляют рост грамположительных бактерий. Дифференциал ингредиент — лактоза. Ферментация этого сахара приводит к кислый pH и вызывает индикатор pH, нейтральный красный, превратить в яркий розово-красный цвет.Таким образом, организмы, способные к ферментация лактозы, такая как Escherichia coli , образует светлый розовато-красные колонии (на фото слева). МакКонки агар обычно используется для дифференциации Enterobacteriaceae .

Организм слева положительный на ферментацию лактозы, а справа отрицательный.

ТОП

Это определенная среда, используемая для определения того, может ли организм используйте цитрат как единственный источник углерода.Часто используется для различения между членами Enterobacteriaceae . У организмов, способных использования цитрата в качестве источника углерода, фермент цитраза гидролизует цитрат на оксаолоуксусную кислоту и уксусную кислоту. Щавелевоуксусный Затем кислота гидролизуется до пировиноградной кислоты и CO ₂ ^{. Если образуется CO ₂ , он вступает в реакцию с компонентами среды с образованием щелочного соединения (например,грамм. Na ₂ CO ₃ ). Щелочной pH превращает индикатор pH (бромтимоловый синий) из от зеленого к синему. Это положительный результат (трубка справа цитрат-положительный). Klebsiella pneumoniae и Proteus mirabilis являются примерами цитрат-положительных организмов. Escherichia coli и Shigella dysenteria e цитратные отрицательный.}

ТОП

Этот агар используется для идентификации организмов, способных продуцировать фермент липаза.Этот фермент секретируется и гидролизует триглицериды. до глицерина и трех длинноцепочечных жирных кислот. Эти соединения достаточно мал, чтобы проходить через стенку бактериальной клетки. Глицерин может превращаться в промежуточный продукт гликолиза. Жирные кислоты могут быть катаболизируются, и их фрагменты могут в конечном итоге попасть в Креб цикл. Спиртовой синий агар содержит эмульсию оливкового масла и спирта. синий краситель. Бактерии, вырабатывающие липазу, гидролизуют оливковое масло. и создадут ореол вокруг роста бактерий.Грамположительный палочка, Bacillus subtilis липазоположительна (изображено на справа) Пластина, изображенная слева, является липазно-отрицательной.

ТОП

Этот тест используется для выявления бактерий, которые могут гидролизовать крахмал (амилоза и амилопектин) с использованием ферментов а-амилазы и олиго-1,6-глюкозидаза.Часто используется для дифференциации видов от роды Clostridium и Bacillus . Из-за большой размер молекул амилозы и амилопектина, эти организмы могут не проходят через клеточную стенку бактерий. Чтобы использовать эти крахмалы в качестве источника углерода бактерии должны секретировать а-амилазу и олиго-1,6-глюкозидаза во внеклеточное пространство. Эти ферменты расщеплять молекулы крахмала на более мелкие субъединицы глюкозы, которые могут затем вступают непосредственно в гликолитический путь.Чтобы интерпретировать результаты теста гидролиза крахмала, йод должен быть добавлен в агар. Йод вступает в реакцию с крахмалом, образуя темно-коричневый цвет. Таким образом, гидролиз крахмала создаст чистую зону вокруг рост бактерий. Bacillus subtilis положительный на крахмал гидролиз (на фото внизу слева). Организм, показанный на справа отрицательно для гидролиза крахмала.

ТОП

Этот тест используется для определения того, какой путь ферментации используется использовать глюкозу.В процессе смешанной кислотной ферментации глюкоза ферментируется и производит несколько органических кислот (молочную, уксусную, янтарная и муравьиная кислоты). Стабильное производство достаточного количества кислоты для преодоления фосфатного буфера приведет к pH ниже 4.4. Если индикатор pH (метиловый красный) добавлен к аликвоте культуральный бульон и pH ниже 4,4, появится красный цвет (первое фото, трубка слева). Если MR становится желтым, значит pH выше 6.0 и смешанный путь кислотной ферментации не использовались (первое изображение, трубка справа). 2,3 бутандиол путь ферментации будет сбраживать глюкозу и производить 2,3-бутандиол конечный продукт вместо органических кислот. Чтобы проверить этот путь, аликвоту MR / VP культуры удаляют и a-нафтол и КОН. Их энергично встряхивают и устанавливают подождите примерно один час, пока не будут видны результаты.Фогес-Проскауэр тест обнаруживает присутствие ацетоина, предшественника 2,3-бутандиола. Если культура положительна на ацетоин, она станет коричневато-красной. до розового »(трубка слева на втором рисунке). Если посев отрицательный на ацетоин, он станет «коричневато-зеленым». к желтому »(трубка слева на втором рисунке). Примечание: Культура обычно будет положительной только для по одному пути : либо MR +, либо VP +. Escherichia coli — это MR + и VP-. В Напротив, Enterobacter aerogenes и Klebsiella pneumoniae являются MR- и VP +. Pseudomonas aeruginosa — глюкоза. nonfermenter и, следовательно, MR- и VP-.

ТОП

CAMP-фактор — это диффузный, термостабильный белок, продуцируемый стрептококки группы B.Это синергетический тест между Staphylococcus aureus и Streptococcus agalactiae . S. agalactiae продуцирует фактор CAMP. S. aureus продуцирует сфингомиелин C, который связывается с мембранами красных кровяных телец. Две бактерии нанесены штрихами под углом 90 ^o друг к другу. Они делают Не трогать. Фактор САМР, продуцируемый S. agalactiae , усиливает бета-гемолиз S.aureus путем привязки к уже поврежденные эритроциты. В результате стрелка бета-гемолиза производится между двумя полосами. Тест является предположительным для S. agalactiae , который продуцирует фактор САМР.

На фото здесь Streptococcus agalactiae был прожилками по всей верхней части тарелки и приносил вниз к центру пластины. Staphylococcus aureus был нанесен прямой линией через центр пластины.Кольца гемолиза очевидны вокруг S. aureus , однако гемолиз, если он значительно усиливается (в форме стрелки) где S. agalactiae пересекает кольца гемолиза.

ТОП

Этот тест используется для выявления бактерий, способных гидролизовать мочевина с помощью фермента уреазы.Обычно используется для различения род Proteus от других кишечных бактерий. Гидролиз мочевины образует слабое основание, аммиак, как один из его продуктов. Это слабое основание повышает pH среды выше 8,4 и pH индикатор, фенолово-красный, меняет цвет с желтого на розовый. Proteus mirabilis — это быстродействующий гидролизатор мочевины (центральная трубка на фото). В пробирка справа была засеяна микроорганизмом, отрицательным по уреазе. и крайняя левая пробирка не была заражена.

ТОП

Агар подвижности

— дифференциал среда, используемая для определения того, оснащен ли организм жгутики и, таким образом, способны плавать от укола. Результаты агара подвижности часто трудно интерпретировать. Как правило, если вся трубка мутная, это означает, что бактерии отошли от укола (подвижны).Организмы в двух трубках, изображенных справа, подвижны. Если, однако, след от укола отчетливо виден, а остальная часть трубка не мутная, вероятно, организм неподвижен (трубка на фото слева).

Физические свойства минералов

Ученые призывают с осторожностью использовать тесты бокового потока для скрининга на Covid-19 | Новости

Предварительный обзор устройства с боковым потоком (LFD), используемого при массовом скрининге на Covid-19 в Ливерпуле, привел к тому, что некоторые ученые выразили опасения, что оно не соответствует назначению. Они также не согласились с некоторыми утверждениями правительства, касающимися этих данных.Правительство утверждает, что LFD «точны» и «достаточно чувствительны», чтобы их можно было использовать в обществе, в том числе для бессимптомных людей.

Быстрый и простой в использовании тест на обнаружение Covid-19 является ключом к плану правительства по ослаблению ограничений на изоляцию. Используемый в настоящее время «золотой стандарт» ОТ-ПЦР-тест должен проводиться в лаборатории и не подходит для массового тестирования.

В обзоре, проведенном PHE Porton Down и Оксфордским университетом, было рассмотрено 40 устройств, но только девять соответствовали некоторым критериям производительности, и только диагностическая компания Innova была достаточно продвинута для оценки — восемь все еще проходят испытания, результаты пока не опубликованы.Команда оценивала LFD в лабораторных условиях и в общественных местах в течение трех месяцев. Его чувствительность составляет 76,8%, а специфичность — 99,68%. Чувствительность — это способность теста правильно идентифицировать пациентов с заболеванием, в то время как специфичность — это мера точности теста при выявлении тех, у кого болезнь не проверена.

обычно используются для тестирования различных целевых белков, поскольку они относительно дешевы, просты в использовании и точны — например, домашний тест на беременность.LFD обнаруживают вирусный белок, а не РНК, как в тесте RT-PCR, и могут предоставить результаты менее чем за полчаса.

Жидкий образец помещается на подушечку, где целевые белки — в данном случае белки Sars-CoV-2 — связываются конъюгированными антителами. Смесь белок-антитело перемещается вдоль мембраны за счет капиллярного потока как через «тестовую», так и «контрольную» полоски. Эти полоски покрыты антителами, которые могут обнаруживать интересующий белок. Когда белок обнаружен, появляется цветная линия.

«Совершенно непригоден»

Джон Дикс, , профессор биостатистики Университета Бирмингема, , сказал, что этот тест «совершенно не подходит» для тестирования в сообществе, например, запланированного для студентов университетов в преддверии Рождества. «Поскольку тест может пропустить до половины случаев, отрицательный результат теста указывает на снижение риска Covid, но не исключает Covid», — добавил Дикс. «Это свидетельство вызывает серьезные опасения по поводу того, что пользы, вероятно, будет немного, с серьезным риском вреда, если общественность будет введена в заблуждение необоснованными заявлениями правительства о высокой эффективности этого теста.’

Дикс указал, что в заголовке отчета 76,8% чувствительности смешиваются данные из разных источников. Одно исследование устройства Innova в центре тестирования показало, что устройство пропустило один из каждых двух случаев Covid-19 (58%). Другое исследование, в котором медсестры проверяли пациентов, показало, что он пропускал каждый четвертый случай (73%).

Себастьян Джонстон, профессор респираторной медицины и аллергии в Имперском колледже Лондона, согласился с тем, что чувствительность теста «недостаточно хороша», особенно когда он используется населением.Он отметил, что в одном исследовании о чувствительности 95% сообщалось только тогда, когда тест использовался профессионалом и когда вирусная нагрузка превышала 100 000 копий РНК / мл. «Это много вируса. Между 1000–100000 копий РНК / мл тест обнаружил 78% случаев при использовании квалифицированным специалистом в области здравоохранения. Ниже 1000 он набирает только 30%, даже когда используется профессионалом ».

Другие проблемы

Еще одна проблема заключается в том, что, хотя количество ложных срабатываний очень низкое (в целом 0,32%, до 0.06%, когда тестирование проводится в лаборатории), количество ложных срабатываний все еще может превышать количество случаев, обнаруженных при массовом обследовании районов с низким уровнем заражения. «Чувствительность и специфичность — это процентные доли людей, которым известно, инфицированы они или нет», — пояснил Кевин МакКонвей, заслуженный профессор прикладной статистики в Открытом университете. «Но при тестировании в реальной жизни вы не знаете [этого]. Получение большого количества ложных срабатываний может не иметь большого значения, например, если новый тест обычно используется для поиска областей с высокими показателями.Но это может иметь значение, если результаты будут использоваться для принятия решений, таких как просьба к людям самоизолироваться. Проблему можно решить, возможно, путем многократного тестирования людей с положительными результатами ».

Дикс и Джонстон также обеспокоены утверждениями правительства о том, что разница в том, насколько хорошо тест выявляет лиц с симптомами и бессимптомных, невелика. Бессимптомным людям было проведено всего 43 теста, поэтому результат является предварительным. Правительство также утверждает, что тест может идентифицировать заразных людей, даже несмотря на то, что обзор не представил никаких доказательств инфекционности.

Однако Джонатан Болл, профессор молекулярной вирусологии в Ноттингемском университете, утверждал, что , хотя в LFD отсутствует чувствительность ПЦР-теста, это «прагматический» тест для наблюдения за сообществом, где важно быстрое выявление инфицированных людей. «Несмотря на то, что он не обнаружит столько инфицированных людей, сколько тест ПЦР, он определит тех, у кого самая высокая вирусная нагрузка. Он не заменит ПЦР, но является полезным дополнительным инструментом ».

Джон Белл, региональный профессор медицины Оксфордского университета, согласился.«Данные показывают, что эти тесты могут сыграть важную роль. Они выявляют тех, кто может распространять болезнь, и при систематическом использовании в массовых тестах может снизить передачу на 90%. Они будут выявлять болезнь у большого числа людей, которые никогда раньше даже не проходили анализы ».

Лаборатория Streptococcus: Id Strep Species General Methods Section 1

Раздел I.

Схема рабочего процесса для лаборатории

1. Если культура представляет собой неидентифицированный грамположительный кокк, Enterococcus , viridans Streptococcus или неизвестной идентичности (в основном, включает все культуры, кроме пневмококков, ß-гемолитических стрептококков и питательных стрептококков), инокулируйте следующие СМИ.Засейте чашку агара с 5% -ным агаром с триптиказо-соевым агаром, нанося тяжелый посевной материал на одну четверть чашки, а оставшуюся часть — для изолированных колоний. Поместите диск ванкомицина на самую тяжелую часть посевного материала и поместите планшет в сосуд для тушения свечей или инкубатор CO ₂ на 18–24 ч при 35 ° C.
2. Если культура идентифицирована как бета-гемолитический стрептококк или стрептококки группы A, B, C, F или G, засевайте пластину агара с триптиказо-соевым 5% агаром с овечьей кровью и поместите бацитрациновый диск на тяжелую часть нароста.Все чашки следует инкубировать в сосуде для тушения свечей или инкубаторе с CO ₂ в течение 18 часов при 35 ° C. Для большинства культур, представленных как стрептококки группы А, тех, которые выглядят чистыми в представленной культуре, следует засеять 30 мл и 5 мл бульона Тодда-Хьюитта (THB). Поместите 5 мл THB в инкубатор на 30 ° C или оставьте при комнатной температуре на 1-3 дня. 5 мл THB используют для типирования Т-агглютинации стрептококков группы А. Поместите 30 мл бульона при 35 ° C на 16–18 часов. Не инкубируйте дольше 18 часов.Для бета-гемолитических стрептококков, отличных от группы A, 30 мл THB также можно засеять и поместить при 35 ° C на 18–24 часа. Некоторым штаммам может потребоваться более одного дня инкубации, инкубация этих бульонов более 24–72 часов не причинит вреда. 30 мл THB используется в некоторых случаях для серогруппировки и серотипирования.
3. Если культура представлена ​​как питательная недостаточность Streptococcus (NVS), засевайте всю чашку триптиказо-соевого кровяного агара культурой. Перпендикулярно этой полосе аккуратно нанесите одну полосу с культурой Staphylococcus aureus .Этот тест определит, образует ли неизвестная культура колонии-спутники, прилегающие к стафилококкам, что характерно для всех NVS. Инкубируйте планшет в CO ₂ или в сосуде для тушения свечей при 35 ° C в течение 24–48 часов.

Примеры необычных или неожиданных результатов:

Чашки с кровяным агаром, используемые описанным выше способом, предназначены для проверки чистоты культур. Если какие-либо результаты необычны или неожиданны, или если культура загрязнена, тест необходимо повторить.

Стрептококки, устойчивые к ванкомицину, или другие неизвестные, кроме лейконостоков и педиококков, которые по своей природе устойчивы к ванкомицину.

AccuProbe-

1. Принцип
   Тест AccuProbe- Enterococcus используется для помощи в идентификации атипичных энтерококков и для дифференциации штаммов Enterococcus и Lactococcus .
2. Инокулят
   Ночная культура, выращенная на кровяном агаре, инкубированная при 35 ° C в CO ₂ .
3. Реактивы и материалы
   Genprobe Accuprobe Enterococcus Тест идентификации культуры, GEN-PROBE Inc. Сан-Диего, Калифорния
4. Процедура
   Тест проводится в соответствии с инструкциями, вложенными в пакет.
5. Чтение и интерпретация
   Автоматизировано
6. Ограничения
   Будьте осторожны с количеством используемых колоний. Слишком много колоний приведет к ложноположительному результату.
7. Контроль качества
   Контроль качества, положительные и отрицательные реакции определяются каждый день после определения результатов теста. E. faecalis SS1273 и S. sanguinis SS910 использовали в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

AccuProbe-

1. Принцип
   Тест AccuProbe- Pneumococcus используется для помощи в идентификации атипичных пневмококков и для дифференциации штаммов viridans Streptococcus .
2. Инокулят
   Ночная культура, выращенная на кровяном агаре, инкубированная при 35 ° C в CO ₂ .
3. Реагенты и материалы
   Genprobe Accuprobe Пневмококк Тест идентификации культуры, GEN-PROBE Inc. Сан-Диего, Калифорния
4. Процедура
   Тест проводится в соответствии с инструкциями, вложенными в пакет.
5. Чтение и интерпретация
   Автоматизировано
6. Ограничения
   Будьте осторожны с количеством используемых колоний. Слишком много колоний приведет к ложноположительному результату.
7. Контроль качества
   Контроль качества, положительные и отрицательные реакции определяются каждый день после определения результатов теста. S. pneumonia и S. sanguinis SS910 используются в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

Образование кислоты в углеводных бульонах

1. Принцип
   Способность бактерий образовывать кислоту в некоторых углеводных бульонах, но не в других, может использоваться в схемах идентификации. Если бактерии подкисляют углевод, pH изменится, и индикатор (бромкрезоловый пурпурный) станет желтым.
2. Инокулят
   Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята.
3. Реактивы и материалы
   1. Бульон Heart Infusion с 1% углеводов и 0,16 бром-крезоловым пурпурным индикатором. Большинство углеводных бульонов коммерчески доступны (Ремел). Звездочкой отмечены те, которые сделаны CDC media lab.
   2. Пипетка
4. Процедура
   1. Засейте пробирку углеводного бульона 1-3 каплями посевного материала. 2. Затем пробирку с бульоном инкубируют при температуре 35 ° C до 7 дней на воздухе. Придирчивые организмы могут содержаться до 14 дней.
5. Чтение и интерпретация
   Положительная реакция регистрируется, когда бульон становится желтым. Отрицательная реакция — это отсутствие изменения цвета. Определенное изменение цвета, не совсем желтого, можно интерпретировать как слабую положительную реакцию.
6. Ограничения
   Не инкубируйте в CO ₂ , так как это может изменить pH.
7. Контроль качества
   Каждая партия и партия углеводной бульонной среды при поступлении в лабораторию проверяются на наличие положительных и отрицательных реакций.Штаммы и реакции для каждого бульона перечислены ниже.

Начало страницы

Гидролиз аргинина

1. Принцип
   Некоторые бактерии содержат ферменты, гидролизующие аргинин.Этот гидролиз приводит к щелочному изменению среды, что приводит к изменению цвета среды. Этот тест можно использовать для дифференцированных различных бактерий.
2. Инокулят
   Капля бульонной культуры Тодда Хьюитта, выращенная в течение ночи, является предпочтительным инокулятом. В качестве альтернативы в качестве инокулята можно использовать суспензию в бульоне Тодда Хьюитта, образовавшегося в результате роста на чашке или небольшого количества нароста на чашке.
3. Реактивы и материалы
   1. Декарбоксилазный бульон Мёллера, содержащий аргинин.Среда имеется в продаже.
   2. Пипетка или петля
4. Процедура
   1. Добавьте 1-3 капли культуральной суспензии в пробирку с декарбоксилазной средой Мёллера, содержащей аргинин
   2. Немедленно покрыть стерильным минеральным маслом (примерно 1-2 мл).
   3. Среду инкубируют при 35 ° C до 7 дней на воздухе. (Некоторые привередливые организмы могут удерживаться до 14 пенсов.)
5. Считывание и интерпретация
   Регистрируется положительная реакция, когда бульон становится темно-фиолетовым, что указывает на щелочную реакцию, выделяется NH ₃ .Появление желтого цвета или отсутствие изменения цвета бульона свидетельствует об отрицательной реакции.
6. Контроль качества
   Каждая новая партия и партия среды проверяется на наличие положительных и отрицательных реакций. E. faecalis штамм SS1273 используется для определения положительных реакций, а S. avium штамм SS817 используется для определения отрицательных реакций.

Начало страницы

Тест на бацитрацин

1. Принцип
   Бацитрациновый диск — это тест на чувствительность, используемый для дифференциации бета-гемолитического стрептококка Streptococcus .
2. Инокулят
   Ночная культура, выращенная на 5% агаре с овечьей кровью, инкубированная при 35 ° C в CO ₂ .
3. Реактивы и материалы
   1. бацитрациновый диск «А» (BBL)
4. Процедура
   1. Выберите бета-гемолитическую колонию и сильно засевайте квадрант чашки с агаром с 5% овечьей кровью.
   2. Бросьте диск «А» в самой тяжелой зоне посева.
   3. Слегка постучите по диску, чтобы убедиться, что он прилегает к агару.
   4. Инкубируйте планшет в течение ночи в CO ₂ при 35 ° C.
5. Чтение и интерпретация
   Любая зона подавления считается положительным тестом или чувствительным тестом. Рост до края диска интерпретируется как отрицательный тест или тест на устойчивость.
6. Ограничения
7. Контроль качества
   Контроль качества проводится для каждой партии и партии бацитрацинового диска. Streptococcus pyogenes — положительный (чувствительный контроль), а Enterococcus faecalis SS1273 — резистентный или отрицательный контроль.Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Тест на эскулин желчи

1. Принцип
   Селективная и дифференциальная среда, используемая для идентификации каталазонегативных бактерий. Селективный агент желчи, подавляет большинство грамположительных бактерий. Энтерококки и стрептококки bovis будут расти. Эскулин в среде гидролизуется до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с хлоридом железа в среде с образованием черно-коричневого цвета.
2. Инокулят
   Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокуляционную петлю с культурой.
3. Реактивы и материалы
   1. Желчный эскулин наклонный (Remel)
4. Процедура
   1. Пробирка для посева с 1 каплей посевного материала, позволяющая капле стечь под наклоном. В качестве альтернативы, скошенный сент может быть засеян петлей роста из чашки с кровяным агаром.
   2. Затем скос инкубируют при 35 ° C в течение 2 дней на воздухе. Придирчивые организмы могут содержаться до 14 дней.
5. Чтение и интерпретация
   Тест на эскулин желчи дает положительный результат, когда черный цвет образует более половины или более уклона. Если почернения не происходит, тест отрицательный.
6. Ограничения
   Не инкубируйте среду в атмосфере двуокиси углерода. Увеличение C0 ₂ приведет к лучшему росту стрептококков viridans и увеличит вероятность положительной реакции на БЭ. Streptococcus bovis и энтерококки не требуют C0 ₂ для хорошего роста.
7. Контроль качества
   Положительные и отрицательные реакции определяются на каждую новую партию и отгрузку среды. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 используется для реакций положительного контроля, а штамм Streptococcus sanguinis SS-910 используется для реакций отрицательного контроля. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Желчь Растворимость Тест

1. Принцип
   Цель теста на растворимость в желчи — помочь дифференцировать S.pneumonia e от всех других альфа-гемолитических стрептококков. Дезоксихолат натрия (2%) действует на клеточную стенку пневмококков, вызывая лизис.
2. Инокулят
   Ночная культура, выращенная на кровяном агаре, инкубированная при 35 ° C в CO ₂ .
3. Реактивы и материалы
   1. 2% дезоксихолат (Центральная сервисная лаборатория CDC, формула № 5333)
   2. физиологический раствор pH 7,0 Стеклянная трубка 3,13 X 100 мм
4. Процедура
   1. Приготовьте 1,0 мл физиологической суспензии клеток, выращенных на чашке с агаром.Следует использовать мутность, равную стандарту плотности МакФарланда от 1,0 до 2,0.
   2. После достижения удовлетворительной плотности суспензию разделите на 2 пробирки примерно по 0,5 мл в каждой.
   3. Добавьте 0,5 мл 2% дезоксихолата натрия (желчных солей) в одну пробирку и 0,5 мл физиологического раствора в другую пробирку. Перемешать энергичным встряхиванием.
   4. Инкубируйте пробирки при 35–37 ° C до 2 часов.
5. Чтение и интерпретация
   Периодически проверяйте наличие мутности.Устранение помутнения в желчной трубке, но не в контрольной пробирке с физиологическим раствором, указывает на положительный результат теста, т.е. пневмококковые клетки лизировались («солюбилизировались»). Если трубка, содержащая клетки и желчь, не очистилась, тест отрицательный. Иногда некоторые штаммы пневмококков лишь частично растворяются в желчных солях, то есть происходит частичное очищение. Эти штаммы должны иметь соответствующую зону ингибирования вокруг оптохинового теста, чтобы их можно было назвать пневмококками. Частично растворимые штаммы с зонами ингибирования менее 14 мм не считаются пневмококками.
6. Ограничения
   Мутность должна быть достаточной для определения разницы в контрольной пробирке с физиологическим раствором.
7. Контроль качества
   Каждую новую партию дезоксихолата проверяют на наличие положительных и отрицательных реакций с использованием штамма S. pneumonia e ATCC-49619 (положительный результат) и S. mitis штамм SS-429 (отрицательный результат). Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тест лагеря

1. Принцип
   Некоторые бактерии продуцируют фактор САМР (диффундирующий внеклеточный белок), который синергетически действует с бета-лизином Staphylococcus aureus и усиливает лизис красных кровяных телец.Целью теста CAMP является помощь в идентификации негемолитических стрептококков группы B и других ß-гемолитических стрептококков.
2. Посевной материал
   Рост из чашки с кровяным агаром или любой твердой среды.
3. Реактивы и материалы
   TSA-агар с овечьей кровью
4. Процедура
   1. CAMP-тест проводится на агаре TSA с овечьей кровью. Одиночная полоска ß-лизина, продуцирующая S. aureus , проходит по центру пластины. Штамм SS-695 (номер лаборатории Strep. Lab представляет собой штамм-продуцент ß-лизина S.Ауреус .
   2. Одиночная колония неизвестного штамма (бета-гемолитические стрептококки) отбирается с помощью посевной петли и используется для создания одной полосы перпендикулярно, но не касаясь полосы S. aureus . Между полосами должно оставаться расстояние 2-3 мм.
   3. Инкубируйте засеянный планшет в нормальной атмосфере в течение ночи при температуре 35 ° C. Стрептококки группы B и некоторые другие бета-стрептококки вызывают усиление активности ß-лизина штамма S. aureus .
5. Чтение и интерпретация
   Это расширенное упражнение имеет форму наконечника стрелки на стыке двух полос, причем самая широкая часть наконечника стрелки находится на стороне группы B.
6. Ограничения
   Не инкубируйте в анаэробной среде или при CO ₂ . Некоторые штаммы S. pyogenes дают положительную реакцию при инкубации в CO ₂ .
7. Контроль качества
   Коммерчески доступный агар TSA с овечьей кровью не всегда демонстрирует правильную реакцию CAMP.Поэтому необходимо тестировать известный стрептококк группы B на реакцию CAMP в качестве положительного контроля на каждой тестовой пластине. Штамм стрептококка группы B SS-617 следует использовать в качестве положительного контроля на каждой тестовой пластине.

Начало страницы

Тест каталазы

1. Принцип
   Перекись водорода (H ₂ O ₂ ) используется для определения того, продуцируют ли бактерии фермент каталазу.
2. Посевной материал
   Культуры, выращенные на среде, не содержащей крови, или колония, выращенная на чашке с кровяным агаром, которую осторожно переносят на предметное стекло без переноса каких-либо эритроцитов.Культуры обычно выращивают в течение ночи при 35 ° C в CO ₂ .
3. Реактивы и материалы
   1. Трехпроцентный перекись водорода получают в коммерческой аптеке.
   2. Пипетка
   3. Слайды
4. Процедура
   1. Тест на каталазу лучше всего выполнять, залив рост бактерий (обычно на скошенной поверхности агара, но можно использовать чашки с агаром без крови) 1,0 мл 3% перекиси водорода и наблюдая за вскипанием (пузырьками), указывающими на положительный тест.Бактерии необходимо выращивать на среде, не содержащей крови.
   2. Модификации теста на каталазу могут быть выполнены путем очень осторожного удаления колонии роста с чашки с кровяным агаром с помощью пластиковой иглы или деревянной палочки-аппликатора и переноса колонии на предметное стекло. К колонии на предметном стекле добавляют каплю 3% перекиси водорода и наблюдают за вскипанием.
5. Чтение и интерпретация
   Любой признак пузырьков интерпретируется как положительный результат теста. Отсутствие пузырей трактуется как отрицательный.
6. Ограничения
   Получение ложноположительных результатов при переносе эритроцитов. Слабые положительные результаты следует повторить на среде без крови. Тест на каталазу очень эффективно дает большинство различий, однако в некоторых случаях тест на каталазу и морфология колоний будут вводить в заблуждение.
7. Контроль качества
   Контроль качества каталазы проводится один раз на партию и отгрузку. Для получения положительной реакции используйте посевы без крови на Staphylococcus aureus : i.е., штамм Cowen I, но можно использовать и другие подтвержденные культуры стафилококков. Для отрицательной реакции используют штамм Streptococcus sanguinis SS-910 (ATCC-10556). Сделайте запись в руководстве по контролю качества.

Начало страницы

Тест на клиндамицин

1. Принцип
   Устойчивость бактерий к клиндамицину определяют с помощью диска клиндамицина в концентрации 2 мкг / мл. Эта устойчивость полезна для дифференциации вида Lactococcus .
2. Посевной материал
   Рост из чашки с кровяным агаром или любой твердой среды.
3. Реактивы и материалы
   1. диск клиндамицина 2 мкг / мл
   2. пластина кровяного агара
4. Процедура
   Бактерии распределяют на чашку с агаром с 5% овечьей кровью, диск помещают на чашку и планшет инкубируют при 35 ° C в течение 18-24 часов в CO ₂ .
5. Чтение и интерпретация
   Любая зона запрета вокруг диска считается чувствительной. Зоны обычно Ξ20мм.
6. Ограничения
7. Контроль качества
   Контроль качества проводится для каждой партии и отгрузки. Lactococcus lactis использовали для отрицательного контроля (чувствительный), а L. garviae использовали для положительного контроля (резистентный).

Начало страницы

Гидролиз эскулина

1. Принцип
   Дифференциальная среда, используемая для идентификации каталазонегативных бактерий. Эскулин в среде гидролизуется до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с хлоридом железа в среде с образованием черно-коричневого цвета.
2. Инокулят
   Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята.Также можно использовать инокулирующую петлю культуры из чашки с кровяным агаром.
3. Реактивы и материалы
   1. Эскулин наклонный (Ремель)
4. Процедура
   1. Засейте косую пробирку 1-3 каплями посевного материала, чтобы капля стекала по наклонной поверхности. В качестве альтернативы, скошенный сент может быть засеян петлей роста из чашки с кровяным агаром.
   2. Затем скос инкубируют при 35 ° C в течение 7 дней на воздухе. Придирчивые организмы могут содержаться до 14 дней.
5. Чтение и интерпретация
   Тест на эскулин положительный, когда черный цвет образует более половины или более уклона.Если почернения не происходит, тест отрицательный.
6. Ограничения
   Не инкубируйте среду в атмосфере двуокиси углерода. Увеличение C0 ₂ приведет к лучшему росту стрептококков viridans и увеличит вероятность положительной реакции. Streptococcus bovis и энтерококки не требуют C0 ₂ для хорошего роста.
7. Контроль качества
   Положительные и отрицательные реакции определяются на каждую новую партию и отгрузку среды. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 используется для реакций положительного контроля, а штамм Streptococcus mitis SS-429 используется для реакций отрицательного контроля.Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Газ из бульона МРС

1. Принцип
   Производство газа из глюкозы проверено в бульоне Lactobacillus MRS.
2. Инокулят
   Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокулирующую петлю культуры из чашки с кровяным агаром.
3. Реактивы и материалы
   Бульон MRS готовят в центральной лаборатории CDC, формула No.9208. Вазелин также готовят в центральной сервисной лаборатории CDC, формула № 9356.
4. Процедура
   В бульон засевают 2 или более колоний из чашки или 1-2 капли бульонной культуры. Затем бульон закрывают расплавленным вазелином и инкубируют пробирку при температуре окружающей среды 37 ° C до 7 дней.
5. Чтение и интерпретация
   На образование газа указывает образование газа между бульоном и пробкой из вазелинового масла, которая толкает восковую пробку к верху трубки.Небольшие пузырьки, которые могут накапливаться в течение инкубационного периода, не считаются положительными, только когда восковая пробка отделена от бульона, результат теста считается положительным. Большинство штаммов лейконостока являются положительными через 24 часа, но для некоторых штаммов может потребоваться больше времени.
6. Ограничения
7. Контроль качества
   Каждая новая партия бульона MRS, приготовленная центральной сервисной лабораторией CDC, проверяется на наличие положительных (образование газа) и отрицательных (отсутствие газа) реакций. Leuconostoc mesenteroides штамм SS-1238 (ATCC-8293) используется для получения положительного результата, а штамм Streptococcus sanguinis SS-910 (ATCC-10556) используется для отрицательного образования газа.Результаты записываются в журнал контроля качества.

Начало страницы

Краситель по грамму

1. Принцип
   Окраска по Граму используется для различения грамположительных и грамотрицательных бактерий. Также может быть определена клеточная морфология. И грамположительные, и грамотрицательные бактерии окрашиваются кристаллическим фиолетовым. Добавление йода образует комплекс внутри клеточной стенки. Добавление обесцвечивающего средства удаляет пятна с грамотрицательных организмов из-за повышенного содержания в них липидов.Эти клетки окрашиваются в розовый цвет сафранином, окрашивающим контр-краситель.
2. Инокулят
   Окрашивание по Граму можно проводить при росте любого штамма, выращенного на любом типе среды. Однако для этой группы бактерий (грамположительные кокки) лучше всего проводить анализ роста бактерий в тиогликолятном бульоне при 24-часовой инкубации. При приготовлении мазка из тиогликолятного бульона процедура окрашивания видоизменяется. Мазок нельзя прикрепить к предметному стеклу с помощью серы, его необходимо зафиксировать метанолом.
3. Реактивы и материалы
   1. Кристально-фиолетовый морилка
   2. Грамм йода (объединить концентрат йода в граммах с разбавителем йода в граммах)
   3. Раствор для обесцвечивания
   4. Метанол
   5. Слайды
   6. Посевная петля
   7. Микроскоп с иммерсионным объективом
4. Процедура
   1. Распределите одиночную петлю культуры из бульона тиогликолата на предметное стекло микроскопа.Распределите культуру от 1/3 до 1/2 общей площади предметного стекла.
   2. Дайте мазку высохнуть на воздухе. Это может занять до 1 часа в зависимости от температуры и влажности в помещении.
   3. Покройте весь бактериальный мазок 3 или 4 каплями метанола, чтобы зафиксировать мазок, и дайте ему высохнуть на воздухе. Опять же, это может занять до часа.
   4. Покройте бактериальный мазок пятном кристально-фиолетового цвета и дайте постоять 1 минуту. Аккуратно удалите пятно прохладной водопроводной водой и слейте воду с предметного стекла.
   5. Залейте мазок граммами йода и дайте постоять 1 минуту. Аккуратно смойте йод водой и слейте воду с предметного стекла.
   6. Промойте бактериальный мазок раствором обесцвечивающего средства в течение 10 секунд; обесцвечивание завершено, когда раствор стекает с предметного стекла. Осторожно промойте водой и слейте воду с предметного стекла.
   7. Покройте бактериальный мазок пятном сафранина и дайте постоять 1 минуту, затем осторожно смойте пятно с предметного стекла.
   8. Промокните предметное стекло абсорбирующей бумагой и осмотрите предметное стекло под масляной иммерсионной линзой.
5. Чтение и интерпретация
   Окраска по Граму используется для помощи в дифференцировке грамположительных кокков. Расположение клеток помогает различать роды. Бактерии, которые делятся в произвольных плоскостях, образуют гроздья клеток, напоминающие виноград. Такой тип расположения обычно наблюдается у стафилококков. Бактерии, которые делятся на одной плоскости, образуют пары и в конечном итоге образуют цепочки, если клетки остаются прикрепленными друг к другу. Такой тип клеточной морфологии наблюдается у стрептококков.Бактерии, которые делятся на две плоскости под прямым углом, образуют пакеты из четверок или тетрад. Такое расположение наблюдается у аэрококков. Одна из самых сложных задач, стоящих перед микробиологом, — определить, действительно ли клеточная морфология клеток является кокками или короткими палочками. Поскольку многие лактобациллы представляют собой короткие цепочки грамположительных палочек, их иногда путают со стрептококками. Клинические источники и морфология колоний на пластинах с кровяным агаром лактобацилл также аналогичны стрептококкам, особенно членам стрептококков viridans.При чтении окраски по Граму помните, что клеточная структура никогда не состоит из 100% цепочек, пар, тетрад или кластеров. Микробиолог должен определить наиболее распространенное расположение клеток. Например, для вида Gemella можно наблюдать несколько пар и коротких цепочек, а также тетрады. Если тетрады наблюдаются в большинстве наблюдаемых полей, то деформация делится на две плоскости, и это следует регистрировать.
6. Ограничения
   Более молодые культуры дают более характерные наблюдения, чем более старые.Более старые культуры могут окрашивать грамотрицательные. Пятна, подвергшиеся воздействию противомикробных реагентов, могут иметь атипичную морфологию и более подвержены обесцвечиванию. Обесцвеченные грамположительные организмы будут казаться грамотрицательными.
7. Контроль качества
   Контроль качества окрашивания по грамму проводят один раз в неделю. Засейте штамм SS910 Streptococcus sanguinis и Escherichia coli 25922 в среде тиогликолятого бульона и инкубируйте в течение ночи при температуре окружающего воздуха 35 ° C. Подготовьте слайд, используя по 1 петле каждой культуры на том же слайде.Слайды могут быть заранее зафиксированы и сохранены. Завершенная процедура должна показать грамположительные кокки в цепочках и грамотрицательные палочки. Запишите результаты в руководство по контролю качества.
8. Ссылки
   Murray, P.R., Baron, E.J., Jorgensen, J.J., Pfaller, M.A., and Yolken, R.H. Manual of Clinical Microbiology, 8th ed. ASM Press: Вашингтон, округ Колумбия, 2003 г.

Начало страницы

Рост при 10 ° C и 45 ° C

1. Принцип
   Рост при 10 ° C и 45 ° C определяется в основной среде сердечного инфузионного бульона и может использоваться в качестве дифференциального теста для каталазо-отрицательных грамположительных кокков.
2. Инокулят
   Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокуляционную петлю с культурой
3. Реактивы и материалы
   1. Сердечная инфузионная базовая среда для бульона Номер Ремела 061030.
4. Процедура
   1. Две пробирки с бульоном засевают одной или двумя колониями или одной-двумя каплями ночной культуры бульона Тодда Хьюитта.
   2. Инкубируйте каждую пробирку при соответствующих температурах, 10 ° C и 45 ° C. Для инкубатора 10C достаточно холодильника, который можно отрегулировать для поддержания температуры 10C. Холодильник можно использовать для хранения медиа и других материалов. Для инкубатора на 45 ° C лучше всего подходит баня с горячей водой, настроенная на поддержание температуры 45 ° C.
   3. Испытания проводятся минимум 7 дней и до 14 дней в случае медленнорастущих сортов.
5. Чтение и интерпретация
   Увеличение мутности указывает на рост и положительный результат теста.Изменение цвета не требуется для положительного результата теста.
6. Ограничения
   Убедитесь, что уровень воды в водяной бане 45C выше уровня жидкости в трубках. Кроме того, крышки средних пробирок должны быть тщательно закрыты.
7. Контроль качества
   Каждая новая партия бульона проверяется на положительные и отрицательные реакции. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 используется для положительных (ростовых) реакций как при 10 ° C, так и при 45 ° C. Streptococcus sanguinis штамм SS-910 используется для отрицательных реакций (отсутствие роста) как при 10 ° C, так и при 45 ° C.

Начало страницы

Гемолиз

1. Принцип
   Гемолитическая реакция особенно полезна при дифференцировке стрептококков. Гемолитическую реакцию определяют на агаризованных средах, содержащих 5% крови животных. Наиболее часто используемой базовой средой является соевый агар с триптиказой, а наиболее часто используемая кровь — это овечья кровь. Причина использования соевой основы триптиказы заключается в том, что она поддерживает рост всех бактерий, перечисленных в таблице 2. Можно заменить другие базовые среды, если контрольные штаммы всех родов тестируются на рост.Овечья кровь используется из-за удобства тестирования мазков из зева на бета-гемолитические стрептококки. Овечья кровь не поддерживает рост Haemophilus haemolyticus , который похож на стрептококки на агаре, содержащем кровь кролика, лошади или человека.
2. Инокулят
   Чистая культура на твердой среде.
3. Реактивы и материалы
   1. Чашки с соевым агаром с триптиказой, содержащие 5% овечьей крови, получены от Becton-Dickinson Microbiology Systems, Cockysville Md., товар № 21261.
4. Процедура
   1. Штриховая культура для выделения на чашке TSA с 5% овечьей кровью.
   2. Инкубируйте планшет при 35 ° C в CO ₂ в течение 24 часов.
5. Чтение и интерпретация
   Бета-гемолитическая реакция интерпретируется как полное очищение вокруг колонии. Альфа-гемолическая реакция интерпретируется как озеленение вокруг колонии, а гамма-гемолиз интерпретируется как отсутствие изменений в среде, окружающей колонию.Гемолитическая реакция на кровяном агаре сложна и зависит от многих переменных. Для полного объяснения и интерпретации реакций читатель отсылается к публикации 1977 г., CDC Laboratory Update, Isolation and Identification of Streptococci. Часть I. Сбор, транспортировка и определение гемолиза, Приложение 1. Применение интерпретаций гемолитических реакций на стрептококки, описанных в Обновлении, к другим родам не должно быть проблемой.
6. Ограничения
7. Контроль качества
   При нормальных условиях эксплуатации качество чашек с кровяным агаром не контролируется в нашей лаборатории, а контролируется компанией Becton-Dickinson Microbiology Systems.Гемолитическая реакция большинства бактерий, представленных в эту лабораторию, известна и идентифицирована с культурой при отправке. Если проблема должна быть выявлена, то для проверки правильности гемолитических реакций используются штаммы для контроля качества. Streptococcus pyogenes штамм SS-103 используется для определения бета-гемолиза, Streptococcus sanguinis штамм SS-910 используется для определения альфа-гемолиза и Streptococcus bovis штамм SS-752 используется для определения отсутствия реакции (ни бета или альфа-гемолиз) на пластинах с триптиказо-соевым 5% агаром с овечьей кровью.Все реакции определены в соответствии с обновлением лаборатории CDC 1977 года, изоляция и идентификация стрептококков. Часть I. Сбор, транспортировка и определение гемолиза (см. Приложение 1).

Начало страницы

Тест гидролиза гиппурата

1. Принцип
   Некоторые бактерии вырабатывают фермент гиппуратгидролазу, который гидролизует гиппурат натрия с образованием бензойной кислоты и глицина. Добавление хлорида железа к бензойной кислоте приводит к образованию нерастворимого осадка бензоата железа коричневого цвета.
2. Инокулят
   Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокулирующую петлю культуры из чашки с кровяным агаром.
3. Реактивы и материалы
   1. Коммерческие поставщики бульона из гиппурата.
   2. Хорид железа (FeCl ₃ ) Коммерческие поставки. Маркируется как TDA при покупке для bioMereiux
4. Процедура
   1. В бульон гиппурата вносят одну каплю свежей (16-20 ч) культуры бульона Тодда-Хьюитта.
   2. Бульон инкубируют до 7 дней или до появления мутного роста при 35 ° C.
   3. Пробирка с бульоном центрифугируется для осаждения бактерий.
   4. Перенесите 0,8 мл прозрачного супернатанта в небольшую прозрачную пробирку (13 x 100).
   5. Добавьте 0,2 мл реагента хлорида железа к супернатанту. Хорошо смешать.
5. Показания и интерпретация
   Сильный осадок, который не исчезает в течение 10 минут, указывает на положительный результат теста. Прозрачная жидкость золотисто-коричневого цвета свидетельствует об отрицательном результате теста.
6. Ограничения
   Рост должен быть мутным перед тестированием. Некоторые привередливые организмы могут плохо расти.
7. Контроль качества
   Группа B Streptococcus штамм SS-620 использовали в качестве положительного контроля, а штамм E. avium SS-817 использовали в качестве отрицательного контроля. Контроль качества выполняется с каждым новым номером партии и каждой партией бульона гиппурата, а также с каждой новой партией и отгрузкой реагента хлорида железа. Результаты теста контроля качества записываются в журнал контроля качества.

Начало страницы

Антиген группы Лэнсфилда

1. Принцип
   Целью определения группового антигена ß-гемолитических стрептококков является определение вида или вида / группы стрептококков, как первоначально описано Ребеккой Лансфилд. Кислотная экстракция используется для удаления серогруппы из клетки.
2. Инокулят
   Ночная культура объемом 50 мл в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная при 35 ° C.
3. Реактивы и материалы
   1. 50 мл культуры
   2. Капиллярная трубка 50 мкл
   3. м-крезол фиолетовый
   4. Пробирка 13 X 100 мм
   5. баня кипящая
   6. центрифуга
   7. флакон 1 куб. См
   8. Реагенты для серогруппировки
4. Процедура
   1. Центрифугируйте клетки за 20 минут при 2000 об / мин, чтобы получить осадок клеток.
   2. Аспирируйте супернатант.
   3. Добавить 2-3 капли м-крезола пурпурного. По каплям добавляют 0,1 н. HCl, пока цвет не изменится на розовый. Вихрь.
   4. Поместите пробирку в кипящую водяную баню на 10 минут.
   5. После охлаждения перенесите содержимое в пробирку 13 X100.
   6. Центрифуга при 2800 об / мин в течение 10 минут для удаления осадка.
   7. Перенос в чистую пробирку 13 х 100 мм
   8. По каплям добавляют 0,5 н. NaOH до пурпурного цвета.
   9. Центрифуга при 2800 об / мин в течение 10 минут для удаления осадка.
   10. Перелейте во флакон объемом 1 мл с завинчивающейся крышкой.
   11. Набор капиллярных пробирок, добавляя примерно 1 см реагента для определения серогруппы и 1 см экстракта. Будьте осторожны, чтобы между ними не было места или пузырей!
   12. Накройте конец глиной и установите в подставку для глины.
   13. Наблюдать до 30 минут.
5. Показания и интерпретация
   Определенная линия или зона осадков, образующаяся между ними, считается положительной.
6. Ограничения
   Группа D иногда дает слабые реакции.
7. Контроль качества
   Контроль качества осуществляется при приготовлении каждой партии реагента для определения серогруппы.

Начало страницы

Лейцинаминопептидаза (LAP)

1. Принцип
   Некоторые бактерии продуцируют лейцинаминопептидазу, которая гидролизует субстрат лейцин-β-нафтиламид с образованием β-нафтиламина. Цвет от розового до красного образуется при добавлении п-диметиламиноциннамальдегида (реагент PYR) к β-нафтиламину.
2. Инокулят
   Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂ для большинства грамположительных бактерий.Для более требовательных родов, таких как гемеллы, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться более 1 дня инкубации. Тестируемые штаммы выращивают на чашке с кровяным агаром до тех пор, пока не будет замечен рост, достаточный для значительного засева дисков.
3. Реагенты и материалы
   Диск LAP (Remel)
   Реагент PYR
   Петли
   Деионизированная стерильная вода
4. Процедура
   Процедура, которая используется в лаборатории Streptococcus , является измененной из вкладыша в упаковке.Тест PYR обычно проводится одновременно.
   1. Поместите диски на пластину с кровяным агаром в области с небольшим или нулевым ростом или на предметное стекло. Влага от пластины обычно достаточна для регидратации диска. Если диск помещается на предметное стекло, добавляется крошечная капля стерильной деионизированной воды. (НЕ ПЕРЕНОСЫВАЙТЕ ДИСК). Диск LAP удобно разместить слева (L = LAP).
   2. Используя петлю или деревянную палочку, сильно засеять диски. Для получения удовлетворительных результатов необходимо использование двух или более циклов культивирования.
   3. Оставьте планшеты с дисками на столе при комнатной температуре на 10 минут.
   4. Добавьте реагент обнаружения и считайте через 3 минуты.
5. Чтение и интерпретация
   Появление красного цвета в течение 3 минут является положительным. Нет изменений в цвете или желтый цвет отрицательный. Цвет проявляется сразу. Отменить тест через 10 минут.
6. Ограничения
   При использовании слишком малого количества посевного материала могут возникнуть ложноотрицательные реакции.
7. Контроль качества
   Каждая партия и партия LAP-дисков проверяются на наличие положительных и отрицательных реакций. Enterococcus faecalis штамм SS-498 использовали для положительной реакции, а Aerococcus viridans штамм SS-1251 (ATCC-11563) использовали для отрицательной реакции.

Начало страницы

Тест на лакмусовое молоко

1. Принцип
   Целью лакмусового теста молока является определение подкисления и образования сгустков молока в этом тесте. Эти тесты помогают дифференцировать виды Leuconostoc.
2. Инокулят
   Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята.Также можно использовать инокуляционную петлю с культурой.
3. Реактивы и материалы
   Лакмусовое молоко получают от коммерческих поставщиков с использованием их контроля качества.
4. Процедура
   1. Пробирки, содержащие лакмусовое молоко, засевают одной каплей ночной культуры бульона Тодда-Хьюитта.
   2. Инкубируйте при температуре 35 ° C до 7 дней на воздухе. Некоторые привередливые напряжения могут удерживаться в течение 14 дней.
5. Считывание и интерпретация
   Пробирки проверяются на изменение цвета.Трубки начинают окрашиваться в голубой цвет. Об образовании кислоты свидетельствует сначала розовый цвет, а затем он становится белым при продолжении инкубации. Об отрицательной реакции свидетельствует отсутствие изменения цвета. Пробирки также исследуют на предмет сгустка или затвердевания содержимого пробирки. Частичное или полное затвердевание содержимого пробирки свидетельствует о положительной реакции. Об отрицательной реакции свидетельствует отсутствие изменений консистенции содержимого пробирки.
6. Ограничения
7. Контроль качества
   Enterococcus faecalis SS-1273 используется в качестве положительного контроля, а E.hirae , штамм SS-1227, использовали в качестве отрицательного контроля. Контроль качества выполняется с каждым новым номером партии и каждой отгрузкой. Результаты проверки качества записываются в руководстве по контролю качества.

Начало страницы

Тест на подвижность

1. Принцип
   Способность бактерий перемещаться через полутвердую среду полезна для дифференциации бактерий. Этот тест особенно полезен для дифференциации энтерококков.
2. Инокулят
   Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂ для большинства грамположительных бактерий.Для более требовательных родов, таких как гемеллы, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться более 1 дня инкубации.
3. Реактивы и материалы
   1. среда для определения подвижности (Remel, номер 061408)
   2. игла посевная
4. Процедура
   1. В среду засевают посевной иглой, а не петлей. Нанесите колонию на конец иглы с чашки с агаром.
   2. Игла вставляется в центр среды в пробирке примерно на один дюйм.
   3. Пробирку с посевом инкубируют при 30 ° C на воздухе и инкубируют до тех пор, пока не будет наблюдаться хороший рост, в большинстве случаев достаточно от 24 до 48 часов.
5. Считывание и интерпретация
   Штаммы, которые являются подвижными, будут расти наружу к краю пробирки и вниз к ее дну. Отрицательные деформации покажут рост только на линии укола.
6. Ограничения
   Не размещайте тест на подвижность при 37 ° C. Некоторые штаммы становятся неподвижными при 37 ° C, но остаются подвижными при температуре от 25 ° C до 30 ° C.
7. Контроль качества
   Enterococcus gallinarium SS-1228 используется в качестве положительного контроля, а штамм E. faecalis SS-1273 используется в качестве отрицательного контроля. Контроль качества выполняется с каждым новым номером партии и каждой отгрузкой.

Начало страницы

Тест на толерантность к 6,5% NaCl

1. Принцип
   Тесты на толерантность могут использоваться для дифференциации микроорганизмов. Некоторые бактерии могут расти в 6,5% NaCl, а другие подавляются этими концентрациями.Рост в бульоне, содержащем 6,5% NaCl, определяют на основе бульона для инфузии сердца с добавлением еще 6% NaCl. Основа сердечного настоя содержит 0,5% NaCl. Чтобы тест было легче читать, мы добавляем 0,5% -ный индикатор декстрозы и бромкрезоловый пурпурный индикатор.
2. Инокулят
   Свежий инокулят, выращиваемый в бульоне Тодда Хьюитта, является предпочтительным. В качестве альтернативы можно использовать небольшую петлю роста из чашки с кровяным агаром.
3. Реагенты и материалы
   Бульон с 6,5% NaCl 5 мл бульона Тодда Хьюитта Бульон с 6,5% NaCl приготовлен Центральной лабораторией CDC, формула No.1707. Этот состав идентичен модифицированному бульону с 6,5% NaCl, описанному в: Facklam, R. 1973. Сравнение нескольких лабораторных сред для предположительной идентификации энтерококков и стрептококков группы D. Прил. Microbiol. 26: 138-145.
4. Процедура
   1. Одна или две колонии или одна или две капли ночной бульонной культуры засеваются в бульон, содержащий 6,5% NaCl.
   2. Инокулированный бульон инкубируют при 37 ° C на воздухе в течение недели или более в зависимости от характеристик роста тестируемого штамма.Если для получения достаточного количества посевного материала требовалось 2 или 3 дня, то тест на толерантность к NaCl следует инкубировать от 10 до 14 дней. В некоторых случаях (большинство энтерококков) тест дает положительный результат после инкубации в течение ночи.
5. Чтение и интерпретация
   Когда большинство штаммов растет, декстроза ферментируется, и цвет бульона меняется с пурпурного на желтый. Однако изменение цвета не требуется для положительного результата теста. Если наблюдается явное увеличение мутности, которое указывает на рост, без изменения цвета, это также считается положительным результатом.
6. Ограничения
   Для определения толерантности энтерококков и стрептококков viridans к NaCl использовались другие базовые среды (инфузия мозга и сердца и триптиказо-соя), но эти основы не тестировались с другими видами. Контроль качества.
7. Контроль качества
   Каждая новая партия среды, подготовленная Центральной сервисной лабораторией CDC, проверяется на положительные (рост) и отрицательные (отсутствие роста) реакции. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 и Streptococcus sanguinis штамм SS-910 используются для положительных и отрицательных реакций соответственно.

Начало страницы

Тест оптохина

1. Принцип
   Целью оптохинового теста является подтверждение идентификации S. pneumonia e перед серотипированием и помощь в дифференцировке S. pneumonia e от стрептококков viridans во время надзорных исследований.
2. Инокулят
   Изолированные альфа-гемолитические колонии, предположительно пневмококки.
3. Реактивы и материалы
   1. дисков optochin AP @, приобретенных у Becton Dickinson Microbiology Systems, Кокисвилл, штат Мэриленд.
   2. чашки кровяного агара
4. Процедура
   1. Перенесено изолированную колонию и полосу на четверть чашки с кровяным агаром
   2. Поместите оптохиновый диск «P» в верхнюю треть посевного материала. Коснитесь диска, чтобы убедиться, что он остается на носителе после того, как пластина перевернута.
   3. Планшет инкубируют в течение ночи при 35–37 ° C в сосуде для тушения свечей или инкубаторе с диоксидом углерода.
5. Считывание и интерпретация
   Если используется диск диаметром 6 мм, зона ингибирования диаметром не менее 14 мм считается положительной для идентификации пневмококков.Зона подавления от 6 до 14 мм в диаметре считается сомнительной для идентификации пневмококков, поэтому следует провести тест на растворимость в желчи. Штаммы, растворимые в желчи с зонами подавления оптохинов от 6 до 14 мм, считаются пневмококками, а штаммы, не растворимые в желчи с такими же размерами зон, не считаются пневмококками.
6. Ограничения
   Культуры не растут так хорошо в нормальной атмосфере, и большие зоны ингибирования могут вызвать неправильную идентификацию.
7. Контроль качества
   Каждая новая партия и партия дисков optochin AP @ проверяется на наличие положительных и отрицательных реакций. S. pneumonia, штамм е АТСС-49619 ингибируется оптохином (положительная реакция), а штамм S. mitis SS-429 не ингибируется оптохином (отрицательная реакция). Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тест на пигментацию

1. Принцип
   Некоторые бактерии производят пигмент. Цель теста на пигментацию — помочь идентифицировать E.casseliflavus , E. mundtii , E. pallens , E. gilvus и E. sulfureus . Эти энтерококки производят желтый пигмент, который можно обнаружить на нескольких различных средах.
2. Инокулят
   Неизвестный штамм Enterococcus выращивают на чашке с агаром с триптиказо-соевым 5% -ным агаром с овечьей кровью в течение 24 часов в нормальной атмосфере при 35 ° C.
3. Реактивы и материалы
   1. ватный тампон
4. Процедура
   1. С помощью ватного тампона возьмите бактериальный мазок размером 50 мм.
   2. Осмотрите тампон и мазок на наличие ярко-желтого цвета.
5. Чтение и интерпретация
   Цвет от бледного до ярко-желтого интерпретируется как положительный. Кремовый, белый или серый цвет — отрицательный.
6. Ограничения
   Тест следует повторить на культуре еще раз через 48 часов инкубации, если есть какие-либо сомнения относительно результатов через 24 часа.
7. Контроль качества
   E. casseliflavus штамм SS-1229 использовали для положительного контроля и E.faecalis штамм SS-1273 используют в качестве отрицательного контроля для определения пигментации.

Начало страницы

Тест на потребность в пиридоксале (витамин B6)

1. Принцип
   Вариантные по питанию стрептококки ( Abiotrophia и Granulicatella ) обычно очень требовательны и будут расти только на среде с добавками или обогащенном шоколадном агаре. Эти штаммы нуждаются в пиридоксале для роста, в то время как не-NVS — нет. Конечная концентрация в бульоне 0.001% пиридоксаля поддержит рост NVS. Альтернативой выполнению теста на потребность в пиридоксале является спутниковый тест.
2. Инокулят
   Культуры обычно получают на скошенных шоколадных агарах.
3. Реактивы и материалы
   1. 0,01% пиридоксаль *
   2. 2-TSA-пластина с агаром с овечьей кровью

   * 0,01% раствор пиридоксаля удобно хранить в лаборатории. Этот раствор готовят на очищенной воде и стерилизуют фильтрованием. Аликвоту 10 мл разливают в стерильные пробирки.Этот 0,01% раствор следует хранить замороженным при -20 ° C. Используемую аликвоту можно хранить при 4 ° C.

4. Процедура
   1. Добавьте каплю 0,01% раствора на поверхность одной из чашек с агаром TSA-овечьей крови.
   2. Засейте обе чашки предполагаемым штаммом NVS.
   3. Инкубируйте при 35 ° C в CO ₂ от 24 до 72 часов.
5. Чтение и интерпретация
   Если рост наблюдается на чашке, содержащей пиридоксаль, а не на чашке без пиридоксаля, штамм является NVS.
6. Ограничения
7. Контроль качества
   Нет никаких указаний по контролю качества реагентов или сред. Каждую партию пиридоксаля можно протестировать на предмет поддержки роста известного штамма NVS.

Начало страницы

Тест пирролидонилариламидазы (PYR)

1. Принцип
   Некоторые бактерии продуцируют пирролидонилариламидазу, которая гидролизует субстрат L-пирролидонил-β-нафтиламид с образованием β-нафтиламина. Цвет от розового до красного образуется при добавлении п-диметиламиноциннам-альдегида (реагент PYR) к β-нафтиламину.
2. Инокулят
   Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂ . Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Тестируемые штаммы выращивают на чашке с кровяным агаром до тех пор, пока не будет замечен рост, достаточный для значительного засева дисков.
3. Реагенты и материалы
   Диск PYR (Remel)
   Реагент PYR
   Петли
   Деионизированная стерильная вода
4. Процедура
   Процедура, которая используется в лаборатории Streptococcus , является измененной из вкладыша в упаковке.Тест LAP обычно выполняется одновременно.
   1. Поместите диски на пластину с кровяным агаром в области с небольшим или нулевым ростом или на предметное стекло. Влага от пластины обычно достаточна для регидратации диска. Если диск помещается на предметное стекло, добавляется крошечная капля стерильной деионизированной воды. (НЕ ПЕРЕНОСЫВАЙТЕ ДИСК).
   2. Используя петлю или деревянную палочку, сильно засеять диски. Для получения удовлетворительных результатов необходимо использование двух или более циклов культивирования.
   3. Оставьте планшеты с дисками на столе при комнатной температуре на 10 минут.
   4. Добавьте реагент обнаружения и считайте через 3 минуты.
5. Чтение и интерпретация
   Появление красного цвета в течение 3 минут является положительным. Нет изменений в цвете или желтый цвет отрицательный. Цвет проявляется сразу. Отменить тест через 10 минут.
6. Ограничения
   При использовании слишком малого количества посевного материала могут возникнуть ложноотрицательные реакции.
7. Контроль качества
   Каждая партия и партия дисков PYR проверяются на наличие положительных и отрицательных реакций. Enterococcus faecalis штамм SS-498 использовали для положительной реакции, а Streptococcus sanguinis штамм SS-910 использовали для отрицательной реакции.

Начало страницы

Тест на использование пирувата

1. Принцип
   Некоторые бактерии обладают способностью утилизировать пируват, что приводит к изменению pH. Бромтимоловый синий добавляется в среду в качестве индикатора, который приводит к изменению цвета с сине-зеленого на желтый.
2. Инокулят
   Предпочтителен свежий инокулят, выращенный в бульоне Тодда Хьюитта.В качестве альтернативы можно использовать небольшую петлю роста из чашки с кровяным агаром.
3. Реактивы и материалы
   Пируватный бульон (Центральная сервисная лаборатория CDC, формула № 1722)
4. Процедура
   1. Засейте пируватный бульон одной каплей ночной культуры бульона Тодда-Хьюитта неизвестного штамма.
   2. Инкубируйте пробирку при 35 ° C в течение 7 дней на воздухе. Инкубация привередливых штаммов составляет 14 дней.
5. Чтение и интерпретация
   О положительной реакции свидетельствует появление желтого цвета.Если бульон остается зеленым или зеленовато-желтым, результат теста отрицательный. Желтый цвет с оттенком зеленого обычно является положительной реакцией.
6. Ограничения
7. Контроль качества
   Тесты контроля качества проводятся для каждой новой партии приготовленной среды. E. faecalis штамм SS-1273 и S. sanguinis штамм SS-910 использовали в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Спутниковый тест (SAT)

1. Принцип
   Вариантные по питанию стрептококки ( Abiotrophia и Granulicatella ) обычно очень требовательны и будут расти только на среде с добавками или обогащенном шоколадном агаре.Цель теста SAT — определить, является ли неизвестный штамм стрептококков разновидностью питательных веществ стрептококками (NVS). Этим штаммам для роста необходим пиридоксаль. Рост Staphylococcus aureus на чашке агара с овечьей кровью TSA высвобождает эти факторы, позволяя расти NVS. Альтернативой выполнению теста SAT является проверка потребности в витамине B6 (пиридоксале).
2. Инокулят
   Культуры обычно получают на скошенных шоколадных агарах.
3. Реактивы и материалы
   1. Золотистый стафилококк ATCC-25923
   2. TSA-пластина с агаром с овечьей кровью
4. Процедура
   1. Нанесите штриховку представленной культуры по всей поверхности чашки агара TSA-овечий кровяной агар с помощью посевной петли.
   2. Затем наносят одиночную полоску Staphylococcus aureus ATCC-25923 через середину чашки с агаром.
   3. Инкубируйте планшет в сосуде для тушения свечей или инкубаторе с CO2 в течение 24 часов или более.
5. Чтение и интерпретация
   Если штамм представляет собой NVS, рост будет появляться только рядом с полоской стафилококка шириной около 2–5 мм. Стрептококки, не являющиеся NVS, будут расти по всей поверхности чашки с агаром.
6. Ограничения
7. Контроль качества
   Нет никаких указаний по контролю качества для тестирования среды или штамма Staphylococcus для теста на сатилитизм.

Начало страницы

Тест гидролиза крахмала

1. Принцип
   Некоторые бактерии способны гидролизовать крахмал на агаре с добавлением крахмала. Когда в крахмал добавляют йод, он становится темно-синевато-черным. Если крахмал был гидролизован, значит, он не может реагировать с йодом, и область вокруг роста бактерий остается чистой. Этот тест можно использовать для дифференциации некоторых бактерий.
2. Инокулят
   Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂ .Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Каплю бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также можно использовать для нанесения штрихов на чашку.
3. Реактивы и материалы
   1. Двухпроцентный крахмальный агар (CDC Central Services Laboratory, формула № 1710)
   2. Грамм йода
4. Процедура
   1. Засейте чашку крахмального агара одной толстой полосой свежей культуры или нанесите каплю бульонной культуры на чашку.
   2. Инкубируйте планшет в CO ₂ при 35 ° C в течение 48 часов. Некоторым штаммам может потребоваться более длительная инкубация для достаточного роста.
   3. После инкубации залейте планшет йодом по Граму.
5. Чтение и интерпретация
   Чистая зона вокруг роста — положительный тест, свидетельствующий о гидролизе крахмала штаммом. Цвет агара от темно-фиолетового до черного или голубоватого указывает на то, что крахмал не гидролизован, и, следовательно, результат отрицательный. При отрицательных тестах глубокая окраска агара развивается вплоть до роста.
6. Ограничения
   Некоторые привередливые сорта плохо растут.
7. Контроль качества
   Каждая новая партия крахмального агара проходит контроль качества. S. bovis штамм SS-1224 использовали для положительного контроля, а E. avium штамм SS-817 использовали для отрицательного контроля.

Начало страницы

Образование слизи 5% сахарозного агара

1. Принцип
   Целью выращивания неизвестных штаммов на агаре, содержащем 5% сахарозы, является определение способности штаммов образовывать внеклеточные полисахариды (леваны или декстраны) на агаре.
2. Инокулят
   Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂ . Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Каплю бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также можно использовать для нанесения штрихов на чашку.
3. Реагенты и материалы
   Чашки с агаром с 5% сахарозой (Центральная лаборатория центра контроля заболеваний, формула № 1714)
4. Процедура
   1. Засейте 5% сахарозный агар свежим посевным материалом и штрихом для изолированных колоний.
   2. Инкубируйте чашку с агаром в CO ₂ при 35 ° C в течение 48 часов. Некоторым привередливым сортам может потребоваться более длительная инкубация для роста.
   3. Осмотрите пластину на предмет леванов и декстранов. Петлю используют для соскабливания колоний на предмет вязкости или прилипания.
5. Чтение и интерпретация
   Некоторые бактерии продуцируют леван в виде внеклеточного полисахарида. Колонии выглядят очень слизистыми, мукоидными и жидкими или в виде больших смолистых капель на агаре. Некоторые бактерии могут продуцировать декстраны, в которых колонии сухие и прилипают к планшету.Отрицательной реакцией является невозможность увидеть внеклеточный материал на 5% сахарозном агаре при визуальном осмотре или прикреплении петли.
6. Ограничения
7. Контроль качества
   Тесты контроля качества проводятся для каждой партии 5% сахарозного агара. Следующие штаммы используются для контроля качества: Leuconostoc mesenteroides штамм SS-1238 (положительный по продукции слизи — леваны), Streptococcus sanguinis SS910 (положительный результат по прилипанию к декстранам) и Enterococcus faecalis , штамм SS-1273 (отрицательный). для леванов и декстранов).Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

5% сахарозный бульон

1. Принцип
   Целью выращивания неизвестных штаммов на агаре, содержащем 5% сахарозы, является определение способности штаммов образовывать внеклеточные полисахариды (леваны или декстраны) в бульоне.
2. Инокулят
   Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂ . Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня.Каплю бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также можно использовать для нанесения штрихов на чашку.
3. Реактивы и материалы
   Пробирки с 5% сахарозным бульоном (Центральная сервисная лаборатория CDC)
4. Процедура
   1. Засейте 5% сахарозный бульон свежим посевным материалом.
   2. Инкубируйте бульон при 35 ° C в течение 48 часов или дольше. Некоторым привередливым сортам может потребоваться более длительная инкубация для роста.
   3. Проверьте бульон на вязкость или нажмите кнопку геля.
5. Чтение и интерпретация
   Некоторые бактерии продуцируют леван в виде внеклеточного полисахарида.Бульон кажется очень густым и липким. Некоторые бактерии могут продуцировать декстраны, в которых гелевая кнопка прилипает к дну или бокам пробирки. Отрицательной реакцией является отсутствие визуального контроля вязкости или прилипания 5% сахарозного бульона. Наблюдается только увеличение мутности.
6. Ограничения
7. Контроль качества
   Тесты контроля качества проводятся для каждой партии, содержащей 5% сахарозы. Для контроля качества используются следующие штаммы: Leuconostoc mesenteroides штамм SS-1238 (положительный результат по продукции слизи — леваны), Streptococcus sanguinis SS910 (положительный результат по кнопке геля, прилипшей к декстранам) и Enterococcus faecalis , штамм SS-1273 (отрицательно для леванов и декстранов).Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Испытание на толерантность к теллуриту

1. Принцип
   Толерантность к теллуриту определяют на агаризованной среде, содержащей 0,04% теллурита калия. На этой среде будет расти очень мало каталазо-отрицательных грамположительных кокков. Основная цель теста на толерантность к теллуриту — помочь дифференцировать E. faecalis и E. faecium , а также другие энтерококки.
2. Инокулят
   Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂ .Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня. Капля бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также может быть использована для нанесения штрихов на скос.
3. Реактивы и материалы
   1. Скошенные слои теллуритового агара (теллурит калия 0,04%, Центральная сервисная лаборатория CDC, формула № 9358)
4. Процедура
   1. Засейте скос одной каплей свежей (18-24 ч) бульонной культуры Тодда-Хьюитта или полной петлей бактерий из свежей чашки.
   2. Инкубируйте при 35 ° C в течение 7 дней на воздухе.
5. Считывание и интерпретация
   Допуск (положительный результат) указывается всякий раз, когда на поверхности образуются черные колонии. Типичные и вариантные штаммы E. faecalis обычно образуют черные колонии (положительная толерантность) через 48 часов инкубации. Некоторые штаммы E. faecium могут образовывать серые колонии (отрицательная реакция), но большинство красителей не растут на теллуритовой среде. Отрицательный результат — небольшое почернение в нижней части ската.
6. Ограничения
7. Контроль качества
   Проверки качества проводятся для каждой новой партии поставляемой среды. E. faecalis штамм SS-1273 и S. sanguinis штамм SS-910 использовали в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Гидролиз мочевины

1. Принцип
   Мочевина является источником азота для бактерий, продуцирующих уреазу. В результате изменения pH индикатор, феноловый красный, меняет цвет с желтого на красный на розово-красный.Тест на уреазу особенно полезен для идентификации Streptococcus salivarius .
2. Инокулят
   Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂ . Для более требовательных родов, таких как гемеллы, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться более 1 дня инкубации. Капля бактериальной суспензии бульона Тодда Хьюитта также может быть использована для нанесения штрихов на скос.
3. Реактивы и материалы
   1. Агар мочевины Кристенсена (Ремел)
4. Процедура
   1. Засейте косой слой петлей или каплей свежей культуры.
   2. Инкубируют при 35 ° C до 7 дней на воздухе. Прихотливые штаммы инкубируют 14 суток.
5. Считывание и интерпретация
   Положительная реакция регистрируется при появлении светло- или темно-розового цвета на скошенной поверхности агара. Желтый цвет или отсутствие изменения соломенного скоса указывает на отрицательный результат теста.
6. Ограничения
   Ложно-положительные результаты могут быть вызваны гидролизом белка, но этого не наблюдалось с Streptococcus .
7. Контроль качества
   Контроль качества осуществляется по каждой партии и отгрузке. S. salivarius , SS-908 и E. avium , SS-817 используются для положительного и отрицательного контролей соответственно.

Начало страницы

Тест на ванкомицин

1. Принцип
   Тест на ванкомицин проводится аналогично тесту на чувствительность к бацитрацину. Устойчивость к ванкомицину может использоваться для дифференциации некоторых каталазонегативных грамположительных родов.
2. Инокулят
   Штаммы выращивают на чашках с кровяным агаром в течение ночи при 35 ° C в CO ₂ .Для более требовательных родов, таких как Gemella e, аллоиококки и гелькококки, может потребоваться инкубация более 1 дня.
3. Реактивы и материалы
   1. Диск ванкомицина 30 мкг (Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockysville Md. Продукт № 31353) Диски хранят в соответствии с инструкциями производителя.
   2. триптиказо-соевый агар с овечьей кровью чашки
4. Процедура
   1. Перенесите несколько колоний рассматриваемого штамма на половину чашки с кровяным агаром и сильно стейк.
   2. Поместите диск для определения чувствительности к ванкомицину (30 мкг) в тяжелую часть полосы.
   3. Инкубировали планшет в усиленной атмосфере CO ₂ при 37 ° C в течение ночи. Некоторым штаммам (аллоиококки, гемеллы, хелькококки) может потребоваться 48 часов или более, чтобы продемонстрировать достаточный рост для интерпретации теста.
5. Чтение и интерпретация
   Любая зона задержки роста считается положительной (чувствительной). Тест интерпретируется как устойчивый (отрицательный) только в том случае, если есть рост вплоть до края диска.Это не тест на чувствительность, это тест на чувствительность для идентификации.
6. Ограничения
   Для точного анализа требуется достаточный посевной материал.
7. Контроль качества
   Каждая новая партия и партия дисков с ванкомицином тестируются на положительные (чувствительные) и отрицательные (резистентные) реакции. Streptococcus bovis SS1224 использовали в качестве положительной (чувствительной) реакции, а Leuconostoc mesenteroides штамм SS-1238 (ATCC-8293) использовали для отрицательной (резистентной) реакции.Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Тест Фогеса-Проскауэра (VP)

1. Принцип
   Модификация Колбенца теста Фогеса-Проскауэра (VP) может использоваться для определения продукции ацетилметилкарбинола. Тестовые реакции используются для дифференциации бактерий. Цель теста VP — помочь в идентификации штаммов ß-гемолитических стрептококков Streptococcus anginosus (таблица 2). Тест VP также может использоваться для помощи в дифференциации стрептококков viridans на виды / группы (таблица 6).
2. Инокулят
   Предпочтителен свежий инокулят, выращенный в бульоне Тодда Хьюитта. В качестве альтернативы можно использовать небольшую петлю роста из чашки с кровяным агаром.
3. Реактивы и материалы
   1. Тест-бульон Voges-Proskauer (VP) (Remel)
   2. 40% КОН (bioMerieux)
   3. альфа-нафтол (bioMerieux)
4. Процедура
   1. Засейте пробирку с бульоном VP одной каплей или петлей свежего посевного материала.
   2. Инкубируйте 24–48 часов при 35 ° C на воздухе или до тех пор, пока не будет наблюдаться мутный рост.
   3. Перенести 0,5 мл в стеклянную пробирку 13X100.
   4. Добавьте двенадцать капель альфа-нафтола и 4 капли 40% КОН.
   5. Тщательно перемешайте или встряхните пробирки и наблюдайте в течение 30 минут. Пробирку необходимо энергично встряхнуть несколько раз в течение 30 минут.
5. Чтение и интерпретация
   Положительная реакция красного цвета обычно наблюдается в течение 30 минут. Для идентификации стрептококков слабые реакции (розовый или ржавый цвет) интерпретируются как положительные.
6. Ограничения
7. Контроль качества
   Каждая партия и отгрузка среды и реагентов проходят испытания. Enterococcus faecalis SS1273 использовали в качестве положительного контроля, а Streptococcus sanguinis SS910 использовали в качестве отрицательного контроля. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

Начало страницы

Иволги завершили 19-матчевую проигрышную серию против Янки

БАЛТИМОР (AP) — «Балтимор Иволги» завершили свою 19-матчевую серию поражений против «Нью-Йорк Янкиз», используя сильную атакующую игру новичка Райана Маунткасла в победе 6: 3 в пятницу вечером для двухголового разделения.

В первом тайме Мигель Андухар выделился в тай-брейке в девятом иннинге, а Клинт Фрейзер добавил сингл RBI, чтобы дать «Нью-Йорку» победу со счетом 6-5. Гэри Санчес и Бретт Гарднер дважды проехали за «Янки».

Маунткасл поразил двухлетнего Гомера от 21-летнего Дейви Гарсиа во втором иннинге ночного колпака и зажег пятый иннинг с четырьмя пробегами с синглом RBI от Кларка Шмидта, который дебютировал в высшей лиге. Рио Руис последовал результативным синглом, а Пат Валаика увенчал восстание двойным дублем.

Это помогло Балтимору одержать первую победу над Нью-Йорком с 31 марта 2019 года. Это также прервало серию побед янки из 18 игр на Camden Yards.

Гарсиа (0-1) допустил четыре пробежки и пять попаданий при шести аутах во втором своем появлении в высшей лиге.

Он был превзойден стартером «Иволги» Хорхе Лопесом (1-0), который отказался от трех пробежек — ни один не заработал — за пять подач.

В первом матче Андухар был отозван перед игрой, вошел как раннер на седьмом месте и остался на третьей базе.Его сингл против Трэвиса Лэкинса-старшего (2-2) сделал его 5-4, а Фрейзер последовал за ним с синглом RBI.

Джонатан Холдер (2-0) работал восьмым, а Чад Грин получил три аута для своего первого сейва. Холдер побежал сам за себя после того, как Нью-Йорк сжег назначенного нападающего и забил на сингле Андухара.

Додджерс 10, Роки 6

ЛОС-АНДЖЕЛЕС (AP) — Эй Джей Поллок, Джок Педерсон и Муки Беттс были хоумерами в восьмом иннинге, а Лос-Анджелес проиграл драматический турнир Большого шлема Кевина Пиллара несколькими минутами ранее и одержал шестую победу подряд.

Пиллар вывел «Скалистые горы» вперед 6-5 в восьмом матче против Калеба Фергюсона (2-0) и устроил безумный праздник блиндажа своим вторым турниром Большого шлема в карьере. Это лидерство длилось шесть питчей против безжалостных Доджерс, которые выиграли 19 из 22 в общем зачете после того, как выбили пять Хомерс и 15 хитов сезона.

Коди Беллинджер выделил Карлоса Эстевеса (1-1) до того, как Поллок направил своего восьмого хомера в правый центр, а Педерсон последовал за ним со своим шестым хомером. Затем Беттс увенчал свою игру с тремя ударами своим 13-м Гомером, выстрелив с двух раундов от Джеффа Хоффмана.

Уилл Смит ударил на тай-брейке двукратный Гомер в седьмом месте для ведущих Доджерс (30-10). Макс Манси также забил на своем поле, а Кори Сигер совершил две попытки в 11-й подряд победе Лос-Анджелеса на стадионе «Доджер».

Рэймель Тапиа и Сэм Хиллиард отправились в «Скалистые горы» в начале поездки по Южной Калифорнии с шестью играми, которая может стать ключом к их надеждам на плей-офф.

BLUE JAYS 8, RED SOX 7, 1-я игра

RED SOX 3, BLUE JAYS 2, 2-я игра

Яиро Муньос совершил три удара, а «Бостон» спас свой даблхедер в качестве «выездной» команды на «Фенуэй Парк», завершив серию из пяти проигрышей.

Muñoz пошел 6 из 7 в двойном билле с двухпроходным Гомером, двумя двойными и тремя ИКР.

Торонто был «домашней» командой во второй игре, которая была составлена ​​из игры 27 августа в Буффало, штат Нью-Йорк, которая была отложена из-за того, что команды не играли в знак протеста против стрельбы полицией Джейкоба Блейка.

Роуди Теллез ударил соло-хомера «Блю Джейс», который выиграл семь из девяти после того, как занял первое место.

Джош Тейлор (1-1) отдал нулевую по счету подачу облегчения для победы.Мэтт Барнс получил три последних аута для своего четвертого сейва. Сделав свой первый старт в Торонто после того, как его приобрели у Доджерс на имя двух игроков, Росс Стриплинг (3-2) отказался от трех пробежек за 4 1/3 подач.

В этом случае Дэнни Янсен ударил Гомера с двумя пробегами, Трэвис Шоу сделал сольный выстрел, а Блю Джейс удержал n.

Муньос пошел 3 из 3 с двухходовым Гомером и дублем RBI. А.Дж. Коул (2-0) подал иннинг с нулевым счетом, и Энтони Басс получил три аута для своего пятого сейва.Зак Годли (0-4) проиграл.

PHILLIES 5, METS 3

НЬЮ-ЙОРК (AP) — Джейк Арриета оправился от самого короткого старта в своей карьере, разбив семь твердых иннингов, чтобы вывести Филадельфию за Нью-Йорк и одержать пятую победу подряд.

Роман Куинн закрыл ничью с двойным выходом, сингл RBI в седьмом месте.

Мец носил нашивки с номером 41 на рукавах формы в честь кувшина Зала славы Тома Сивера, который умер на этой неделе.

Арриета (3-4), который отказался от семи пробежек в 1 1/3 подач против Атланты в воскресенье, допустил две пробежки и семь попаданий, при ходьбе один и выбив семь.

Джей Брюс и Диди Грегориус имели ранние ИКР, чтобы поставить Арриету вперед 2-0. Майкл Конфорто ударил связующего, двухходового Гомера в пятом, прежде чем Арриета удалил шесть из последних семи отбивающих, с которыми он столкнулся.

Филлис поставили Арриету в очередь на победу в седьмом месте. Джаред Хьюз (1-2) отказался от первых двух игроков, с которыми он столкнулся, прежде чем Фил Госселин удвоился и забил после удара Куинна.

КУБЫ 4, КАРДИНАЛЫ 1

ЧИКАГО (AP) — Ю Дарвиш разбил семь великолепных подач в своей седьмой подряд победе, а Чикаго обыграл Сент-Питерсберг.Луи в открытии большой серии из пяти игр.

Под руководством Дарвиша и Уилсона Контрераса «Чикаго» выиграли в четвертый раз в пяти играх и укрепили свои позиции на лидирующей позиции в NL Central. Сент-Луис проиграл «Детенышам» в виртуальном матче с «Милуоки», проиграв 4 1/2 игры.